BLyS%2fAPRIL及其受体介导佐剂性关节炎大鼠肠系膜淋巴结病理机制及TACI-Ig治疗作用地研究.pdfVIP

目 录 英文缩略词表…………………………………………………………………6 中文摘要………………………………………………………………………8 英文摘要……………………………………………………………….12 1 前言………………………………………………………………………...16 2 实验材料…………………………………………………………………...18 2.1 动物………………………………………………………………………19 2.2 药物与试剂………………………………………………………………19 2.3 仪器和设备………………………………………………………………21 3 实验方法……………………………….…………………………………..22 3.1 大鼠佐剂性关节炎（AA ）模型的诱导………………………………….22 3.2 分组及给药……………………………………………………………22 3.3 大鼠 AA 模型的评价……………………………………………………22 3.4 大鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞（MLNLs ）的分离………………………23 3.4.1 RhBLyS 诱导的 MLNLs 增殖能力实验 (MTT 试验)………………23 3.4.2 RhBLyS 诱导的 MLNLs 中 T 淋巴细胞亚群测定.…………………23 3.5 病理组织学检查…………………………………………….…………24 3.6 大鼠肠系膜淋巴结组织匀浆上清BLyS 、APRIL 、Th1细胞因子IFN- γ、 Th2细胞因子IL-4 、Treg细胞因子TGF- β1、Th17细胞因子IL-17测定….24 3.7 免疫组织化学检测大鼠肠系膜淋巴结组织中 TACI 、BCMA 和 BAFF-R 受体表达情况………………………………………………………………..25 3 3.7.1 试剂及材料………………………………………………………….25 3.7.2 操作流程……………………………………………………………….25 3.7.3 结果判断……………………………………………………………….26 3.8 蛋白免疫印迹法检测肠系膜淋巴结组织总蛋白中 TACI 、BCMA 和 BAFF-R 蛋白表达…………………………………………………………...26 3.8.1 大鼠肠系膜淋巴结总蛋白的提取………………………….………27 3.8.2 蛋白定量法………………………………………………………….27 3.8.3 Western-blot 操作步骤…………………………………………...27 3.9 统计处理………………………………………………….……………29 4 结果………………………………………………………………………29 4.1 TACI-Ig 对 AA 大鼠肠系膜淋巴结组织病理学的影响……………….29 4.2 TACI-Ig 对 AA 大鼠肠系膜淋巴结组织匀浆中 Th1 、Th2 、Treg 、Th17 相关细胞因子 IFN- γ、IL-4 、TGF- β1和IL-17 水平的影响………….……30 4.3 TACI-Ig 对 AA 大鼠肠系膜淋巴结组织匀浆中 BLyS 、APRIL 水平影 响……………………………………………………………………………..32 4.4 TACI-Ig 对 AA 大鼠肠系膜淋巴结组织中 TACI 、BCMA 和 BAFF-R 表 达的影响………………………………………………………………….….33 4.5 TACI-Ig 对 AA 大鼠肠系膜淋巴结组织总蛋白中的 TACI 、BCMA 和 BAFF-R 受体蛋白表达的影响……………………………………………36 4.6 RhBLyS 对 AA 大鼠 MLNLs 功能的影响及 TACI-Ig 的作 用………………………………………………………………..……………38 4 4.6.1 TACI-Ig 对 rhBLyS 诱导的 AA 大鼠 MLNLs 增殖能力的影响…38 4.6.2 TACI-Ig 对rhBLyS 诱导的AA 大鼠MLNLs 中T 细胞亚群的影响…38 5 讨论…………………………………………………………..……………42 5.1