三七皂苷对内皮细胞MMP-活性、巨噬细胞炎症因子表达及血小板凝集抑制作用实验地研究.pdf

·中文论著摘要· 三七皂苷对内皮细胞MMP．活性、巨噬细胞炎症因子 表达及血小板凝集抑制作用的实验研究 --■J■··-●- 刖 瞢 心血管系统疾病中最常见的疾病，严重危害人类健康。目前认为动脉粥样硬化是由 单核／淋巴细胞黏附并激活内皮细胞而导致的一种慢性炎症性疾病，动脉粥样斑块 的形成过程是以低密度脂蛋白为主的各种脂质成分在血管内皮下聚集，继而白细 胞渗出、泡沫细胞形成、血管平滑肌增生以及大量结缔组织形成的病理过程。 基质金属蛋白酶(matrix 外基质中多种蛋白成份的内肽酶家族，其细胞来源极其丰富，可由正常组织细胞、 炎症细胞及肿瘤细胞产生，并且在许多生物活性物质，如细胞因子、自由基和氧 化型低密度脂蛋白等刺激下可异常表达，参与多种病理生理过程，如肿瘤的侵袭 与转移、炎症、胚胎发育及血管再生等。MMPs参与AS斑块的形成，并且由于 其能降解细胞外基质，削弱纤维帽对斑块的保护作用，降低AS斑块中脂质含量 而被认为是引发斑块破裂的最重要细胞因子。因此抑制MMPs的表达可以有效预 防斑块破裂，缓解动脉粥样硬化。 由于动脉粥样硬化是血管壁的慢性炎症性疾病，而细胞因子广泛地参与了炎 症的发生、发展过程，所以细胞因子在动脉粥样硬化中具有重要的作用和意义。 chemoattractant 单核细胞趋化蛋白．1(monocyte protein．1，MCP．1)是单核／巨噬 细胞特异的趋化性因子，其主要功能是趋化和激活单核／巨噬细胞至炎症部位，参与 炎症反应、调节免疫，并促进动脉粥样硬化的形成。细胞白介素．6(Interleukin．6， IL．6)亦参与血管炎症反应，为促动脉粥样硬化的因子。因此，抑制这两种细胞 因子的表达可以抑制动脉粥样硬化病灶的形成。 在AS斑块形成和血脂紊乱的基础上，常伴随着血小板的异常激活。血小板 参与了AS斑块形成的全过程，即血小板本身有致斑块性，血小板参与体内血脂 调节、促进炎症及致氧化应激作用。所以有效抑制血小板的活性可以减缓AS的 、 ．发生与发展。 三七为五加科植物参三七的根，主产于云南、广西等省。三七含有多种化学 成分，其中三七总皂苷(totalsaponins ofpanax 分，人参皂苷Rbl、人参皂苷Rgl为从中提纯所得的单体皂苷。三七皂苷对心脑 血管系统、血液系统、神经系统、免疫系统等均具有广泛的作用，而且能抗肿瘤、 抗衰老等，临床上广泛地应用于心血管疾病、肝炎、外科疾病的治疗。因此，三 七是一味具有广阔开发应用前景的药物。但是其抗动脉粥样硬化的具体机制研究 较少，其单体成分人参皂苷Rbl、人参皂苷Rgl在治疗动脉粥样硬化中的作用尚 不明确。 time 本实验中我们用Real 噬细胞分泌IL．6，MCP．1的影响；利用theflowchamber microchip system观察不 同浓度PNS，Rbl，Rgl对血小板凝集的影响：用明胶酶谱实验观察不同浓度PNS， Rbl，Rgl对人脐静脉内皮细胞MMP．2活性的影响。进而探讨三七皂苷在抗动脉 粥样硬化中的作用机制。 实验方法 一、细胞培养 (一)Tm．1源性巨噬细胞的培养 贴壁分化为巨噬细胞后用于实验。 (二)人脐静脉内皮细胞的原代分离与培养 将取来的脐带迅速移入洁净操作台内，无菌条件下将其放入提fi{f盛有预热 PBS培养皿中，剪去有钳央痕及血肿的部分，挤出脐带中的残血，用剪刀修齐两 断面。找出脐静脉，用带平针头的注射器从一端插入脐静脉，血管钳固定，再用 预热的PBS冲洗3次以上，将血迹完全冲洗干净。从冲洗的针头中注入0．25％胰 2 酶消化液使