《5-氮杂胞苷对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖及成肌分化的影响》.pdfVIP

广州中医药大学学报 2008年9月第25卷第5期 of ofTraditionalChineseMedicine 446 JournalGuangzhouUniversity September2008，V01．25，No．5 文章编号：1007—3213(2008)05—0446一04 5．氮杂胞苷对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖及成肌分化的影响 陈凯佳， 刘小斌， 邱仕君， 周健洪， 肖 莹 (广州中医药大学，广东广州510006) 组：浓度为5、10、15 长增殖的影响；以含5、10、20 24h后，改用完全培养基继续培养，采用免疫组织 0xnol／L5-Xza的培养基诱导培养MSCs 浓度5-Aza诱导培养MSCs后第3天，部分细胞出现desmin阳性表达，诱导后14 关键词：骨髓间充质干细．肜病理学； 5-氮杂胞苷／药理学； 细胞培养，体外的； 蛋白表达 中图分类号：R392．3 文献标识码：A 隆小鼠抗体均为SIGMA公司产品；5一氮杂胞苷 骨髓间充质细胞(MSCs)是千细胞中的一种， 主要存在于全身结缔组织和器官间质中，以骨髓组 织中含量最为丰富。MSCs具有易分离、扩增以及酸盐缓冲液(PBS)、20g／L台盼蓝染液、2．5g／L 体外操作简便等特点，能在一定的诱导条件下向成 胰酶、马血清均由广州威佳公司提供；鼠抗人肌凝 肌细胞分化uJ。本研究观察5一氮杂胞苷(5-Aza) 对大鼠MSCs增殖与成肌分化的影响。现报道 如下。 1材料与方法 司产品；XDS．IB型倒置显微镜为重庆光电产品； 1．1动物纯种SD大鼠，SPF级，4周龄，体质PE一1420多功能微板分析仪为上海PerkinElmer产 量90一130 品；超净台(PURIFIATION g，用于MSCs的提取。由广州中医药 大学实验动物中心提供，许可证号：粤鉴证字 净化设备有限公司产品；TGL一16G型离心机为上海 2005A031SCX(粤)2003-0001。安亭产品；YHl40—1型电热恒温水箱为广州东方 1．2主要试剂与仪器IMDM培养基、特级胎牛产品。 1．3 血清(rBS)为美国GIBCOL公司产品；链霉亲和 素生物素复合物(SABC)、二氨基联苯胺(DAB)大鼠4只，100g／L水合氯醛腹腔注射以麻醉动物。 染色试剂盒、抗体CD54、增殖细胞核抗原无菌条件下取双股骨及胫骨，收集骨髓腔内组织细 000 r／min×20 胞，将细胞悬液分装，2 min密度梯 (PCNA)、生物素化二抗(羊抗小鼠)、DAB显色 度离心2次，收取单核细胞层，加入IMDM培养 剂、5-溴4．氯．3．吲哚一磷酸／氮蓝四唑盐(BCTP／ NBT)显色剂均为武汉博士德公司产品；四甲基偶液，打散成细胞悬液。细胞悬液用20g／L台盼蓝 氮唑盐(MTI)、5一溴脱氧嘧啶(Brdu)及其单克染液染色，计数300个细胞，调整密度，染色蓝色 收稿日期：2007—10一08 作者简介：陈凯佳(1978一)，女，讲师 基金项目：国家重点基础研究发展计划(973计划)课题(编号：2005CB523502) 万方数据 第5期 陈凯佳，等．5一氮杂胞苷对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖及成肌分化的影响447 的死细胞小于5％方可继续实验，计数板计数，