脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化过程中MocrpRNAi活性变化的实验的研究.pdf

军医进修学院硕士学位论丈 脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化过程中MicroRNA活性变化 的实验研究 中文摘要 目的： 1．探索sD大鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)的分离、培养方法； 2．证明ADMSCs在5一氮杂胞苷(5-Aza)诱导下可分化为心肌细胞； iRNA的变化谱。 3．探讨ADMSCs细胞在向心肌细胞分化过程中m 方法： 1．SD大鼠ADMSCs的分离、培养、鉴定：无菌条件下取sD大鼠腹股沟皮下脂 肪组织，采用胰酶加I型胶原酶消化法及贴壁法进行分离培养及形态学观察；取 第3代细胞进行表面抗原的免疫细胞化学鉴定； 2．ADMSCs的体外诱导及鉴定：对第3代细胞行5-hza诱导，观察细胞形态变 化，进行O【一actin及cTnT免疫细胞化学鉴定。 3．测定培养ADMSCs向心肌细胞分化过程中miRNA的变化谱：细胞分为三组， A—Sensor Array) 诱导后培养四周的细胞。应用miRNh生物传感器阵列(miRNA 方法分别检测以上三组细胞的miRNA谱，比较之间的差异。 结果： 1．脂肪组织中含有大量长梭形细胞，成螺旋形生长，免疫化学鉴定显示与空 3、CD44、CDl 白对照相比较细胞表面分子抗原CDl 和VIJl因子均为阴性反应。 养，多数细胞为长梭形，部分细胞形态变为不规则星状或杆状，细胞体积及胞核 变大，部分细胞聚集成团。与空白对照比较28d后多数细胞免疫细胞化学染色显示 O【-actin、cTnT呈阳性反应。 A-Sensor 3．应用miRNh生物传感器阵列(miRNh Array)方法分别检测三组细 胞12 导后细胞的所有miRNA活-性均有所上升。活性上升最为明显的15种miRNA),b页序为： 2 miR一1 let-7a，let一7b，let-7e，let一7f，let一79， miR-92a。 miR一145，miR一21，miR一222，miR一34c一5p， 1．出生三天的sD大鼠脂肪组织中含有具有多向分化潜能的间充质干细胞。 2．1oumo1／L捌s—Aza可诱导脂肪干细胞分化为心肌样细胞。 3．miRNA生物传感器阵列方法同时大批量连续检测多种miRNA活性，利于 miRNA活性谱的连续监测。 4．多种miRNA可能在细胞分化过程中起到重要作用，其中发挥最重要作用的 miRNA可能是1et7家族和miR一21。 关健词：脂肪间充质干细胞；miRNA；SD大鼠。 3 between ofMicroRNAsAdipose Profiles Expression Comparative ells Cellsand C erived Stem Myocardial Tis