无病毒苗木的培育.ppt

脱毒技术在菠萝、香蕉、草莓、马铃薯、菊花、香石竹、唐菖蒲、水仙、郁金香、百合、大丽花、白鹤芋等主要园艺作物上已成功应用。从根本上解决了植物的退化问题。 一、 无病毒苗培育的意义 1、无病毒苗木的概念 是指不含该植物主要的危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现为阴性反应的苗木。 通常危害植物的病毒有几百种，并且随着栽培时间的延长，危害程度越来越严重，种类越来越多。尤其是靠无性繁殖的作物，由于病毒通过营养体进行传递，在母株内逐代积累，危害日趋严重。而以种子进行繁殖的种类，可随着世代的交替而去除病毒，病毒只能危害一个世代。 2、病毒在植物上的危害 病毒的危害给植物生产带来的损失很大，如草莓病毒的危害，使草莓产量严重降低，品质大大退化。葡萄扇叶病毒使葡萄减产10％~18％，花卉病毒的危害一般会影响花卉的观赏价值，其表现是花少而小，产生畸形、变色等。 由于病毒对植物造成如此严童的危害，所以世界各国都积极开始重视这方面的研究。 3、无病毒苗培育的意义 1. 去除病毒危害，提高作物品质与产量。采用生物、物理、化学等途径防治病毒病收效甚微，甚至毫无成效。而通过组织培养的方法可以脱除严重患病毒植物的病毒种类，提高产量、质量。因此，到60至70年代在花卉、蔬菜和果树等得到广泛的应用。 2. 减少环境污染，有利于保护环境. 栽培去病毒植物可减少药剂的使用。 二、 无病毒苗培育的方法 1、热处理脱毒 2、微茎尖培养脱毒 3、其他途径脱毒 1、热处理脱毒 发现： 1889年印度尼西亚爪畦人发现，患枯萎病的甘蔗(现证明为病毒病)，放在50-52℃的热水中保持30min，甘蔗就可去病生长良好。以后此方法被广泛用于防治许多植物的病毒病。 热处理又称温治疗法。 原理： 是当植物组织处于高于正常温度的环境中时，组织内部的病毒受热后部分或全部钝化，不能生成或生成病毒很少，以致病毒含量不断降低从而达到脱毒的目的 。 热处理方法 （1） 温汤浸渍处理 适用：休眠器官、剪下的接穗或种植的材料 方法：50℃左右的温水中浸渍10min至数小时 特点：方法简便易行，但易使材料受伤。 （2） 热空气处理 适用：对活跃生长的茎尖效果较好 方法：将生长的盆栽植株移人温热治疗室(箱)内，一般在35~40℃下处理几十分钟至数月。处理时间因植物而异，如香石竹于38℃下处理两个月，其茎尖所含病毒即可被清除。马铃薯在35℃下处理几个月才能获得无病毒苗。 特点：热处理方法主要缺陷是并非能脱除所有病毒。例如在马铃薯中，应用这项技术只能消除卷叶病毒。因此热处理需与其他方法配合应用，才可获得良好的脱毒效果 。 2、微茎尖培养脱毒 茎尖培养脱毒原理 感染病毒植株的体内病毒的分布不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染程度越低，生长点(分生组织约0.1~1.0mm区域)则几乎不含或含病毒很少。 茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代稳定，所以是目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径。 植物组织内病毒含量随与茎尖距离加大而增加的原因 ① 在植物体内，病毒易于通过微管系统移动，但分生组织中无此系统；病毒在细胞间移动的另一个途径是通过胞间连丝，但它的速度极慢，难以赶上活跃生长的茎尖。 ② 活跃生长的茎尖分生组织代谢活性很高，致使病毒无法复制。 培养基 培养基： 一般以White、Morel和MS作为基本培养基，尤其是提高钾盐和铵盐的含量会有利于茎尖的生长。 植物激素： 其种类与浓度对茎尖生长和发育具有重要的作用。适当提高生长素(0.1~0.5 mg/L)与细胞分裂素的浓度，避免使用易促进愈伤组织化的2，4-D，宜换用稳定性较好的NAA或IBA，细胞分裂素可用Kt或 BA。有时需添加活性炭。 微茎尖培养方法 （1） 外植体的预处理 将带幼叶的茎芽叶片在75％酒精中浸蘸数秒钟（叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花）或用0．1％次氯酸钠表面消毒l0min（叶片包被松散的芽，如香石竹，蒜和马铃薯等）。 （2） 茎尖的剥离与接种 在解剖镜下，将灭菌的外植体放在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内（防止茎尖变干 ），用解剖针将叶片和叶原基剥掉，当一个闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将分生组织切下来(0.2~0.5mm)