《分解纤维素的微生物的分离》.ppt

酶 筛选 操作 结果 延伸 教学目标: 1、知道纤维素酶的种类及作用 2、初步掌握从土壤中分离出分解纤维 素的微生物的实验方法 阅读课本27页基础知识部分第一、二段，回答下列问题： 1、纤维素在生物圈的分布状况？ 2、纤维素酶的组成及作用？ 纤维素(C6H10O5)n是地球上含量最丰富的多糖类物质。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即CX酶、 C1酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 一、纤维素和纤维素酶 纤维素 纤维二糖 葡萄糖 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 草食性动物是怎样消化食物中纤维素的？ 肠胃中的共生微生物。除自然环境中存在分解纤维素的微生物外，在草食性动物等的消化道内，也共生有分解纤维素的微生物，其原理也是产生纤维素酶而分解纤维素，而人没有分解纤维素的能力。 在2支20mL的试管中，分别放入1×6cm的滤纸条，再分别加入pH为4.8、物质的量浓度为0.1mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液10mL、11mL。在加入10mL缓冲液的试管中加入1mL纤维素酶（70~80U/mL）。将二支试管固定在50mL的锥形瓶中，在摇床上以140r/min的转速振荡反应1h，观察结果。 1U表示1个酶活力单位，是指在温度为25℃，其他反应条件，如pH等，均为最适的情况下，在1min内转化1mmol的底物所需的酶量。 底物：酶所作用和催化的化合物。 二、纤维素分解菌的筛选 刚果红(Congo Red,简称RD)是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，这样我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 回答下列问题： 1、纤维素分解菌的筛选方法 2、纤维素分解菌的筛选方法的原理 刚果红染色法：这种方法能够通过颜色反应直接 对微生物进行筛选 刚果红是一种染料，它可以与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解为中心的 。这样我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 透明圈 刚果红染色法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应 方法二：在倒平板时就加入刚果红 思考：这两种方法各有哪些优点与不足？ ①由于产生淀粉酶的微生物也形成透明圈，所以可能产生假阳性反应。 ②有些微生物具有降解色素的能力，他们在培养过程中也会形成明显的透明圈，与纤维素的分解菌不易区分。 操作繁琐，加入刚果红会使菌落之间发生混杂 缺点 操作简便，不存在菌落的混杂问题 显示出的颜色基本上是纤维素分解菌的作用 优点 配置10mg/mL的CR溶液→灭菌→按照1mLCR溶液/200mL培养基的比例混匀→倒平板→接种后培养→出现透明圈 培养基经涂布培养长出菌落→覆盖1mg/mL的CR溶液→(10~15min后)倒去CR溶液→加入1mol/L的NaCl溶液→15min后倒掉NaCl溶液→出现透明圈 步骤 方法二： 方法一： 两种刚果红染色法的比较： 方法一中NaCl溶液的作用？ 思考： 漂洗作用，洗去与纤维素结合不牢的刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。用这方法可以判断酶活力的大小，实际上刚果红是结合到培养基的多糖底物，但分解纤维素的细菌可以产生纤维素酶，能分解这个多糖底物成为单糖，这样刚果红就不能结合上去了，氯化钠溶液就可以使结合不牢的刚果红洗去，这样就留下大大小小的透明圈，大的透明圈当然分解纤维素的能就强！ 练一练： 1、下列关于纤维素酶的说法，错误的是 A、纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种 B、纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖 C、纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁 D、葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖 2、利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是 A、刚果红能与纤维素形成红色复合物 B、刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C、刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物 D、若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌 三、实验操作 土壤取样 选择培养* 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 土壤取样 取样的环境是怎样的，作出这种选择的理由是什么？ 选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯