HE染色免疫组织化学染色实验报告.docVIP

HE染色与免疫组织化学染色实验报告 实验目的及意义 1.1了解石蜡切片的制作过程 1.2 掌握HE染色与免疫组织化学染色的基本原理以及染色方法 1.3 熟悉HE染色与免疫组织化学染色后的读片知识 2 实验方法及步骤 2.1 石蜡切片制作及HE染色步骤 2.1.1取材与固定：从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。脱水透明： 一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。浸蜡包埋： 将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。 片与贴片： 将的蜡块固定于切片机上，微米切成薄片。切下的薄片往往皱折，放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45恒温箱中烘干。 二甲苯Ⅰ20分钟，二甲苯Ⅱ20分钟，无水乙醇3分钟，95％酒精3分钟，80％酒精3分钟，70％酒精3分钟，自来水洗5分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。 2.1.7染色： 苏木素液7分钟，自来水洗5分钟，1％盐酸溶液分化30秒，自来水洗5分钟，1％氨水返蓝10秒，自来水洗20分钟，95％酒精3分钟，1％伊红酒精溶液2分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。 2.1.8脱水和透明： 95％酒精2分钟，无水酒精Ⅰ2分钟，无水酒精Ⅱ2分钟，二甲苯Ⅰ5分钟，二甲苯Ⅱ5分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。 2.1.9封固：将已透明的切片滴上，盖上盖玻片封固2.2.1脱蜡用蒸馏水配置新鲜的3%30%双氧水1：9配制，配100ml），室温封闭分钟，蒸馏水洗抗原修复PBS洗5分钟滴加%BSA封闭液（覆盖满组织为宜），室温20分钟。 2.2.8甩去多余液体滴加2.2.9放入染色缸中PBS洗5分钟2.2.10取出放入湿盒中滴加二抗（覆盖满组织为宜），室温30分钟。2.2.11取出置染色缸中PBS洗5分钟2.2.12取出置染色缸中PBS洗5分钟2.2.13 DAB显色2.2.15苏木素衬染1分钟，流水冲洗5分钟。 2.2.16脱水透明，70％酒精3分钟，80％酒精2分钟，90％酒精2分钟，95％酒精2分钟，95％酒精Ⅱ2分钟，100％酒精Ⅰ2分钟，100％酒精Ⅱ2分钟，100％酒精Ⅲ2分钟二甲苯Ⅰ8分钟，二甲苯Ⅱ5分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。 2.2.17中性树胶封片，放入37℃烘箱。 3 实验结果 3.1 HE 染色结果 IB： 狂犬病毒包涵体（内基氏（Negri）小体A: 小脑浦肯野细胞内包涵体x400; B: 脑神经元内多处包涵体x400 狂犬病的病理变化在显微镜下主要表现为神经元退变,淋巴细胞和单核细胞浸润，胶质细胞增殖以及特征包涵体形成。狂犬病毒包涵体又称为内基体，直径约3～10nm，边缘整齐，内有1～2个状似细胞核的小点 CP： 豆状囊尾蚴虫卵的壳 图2 肝脏与肾脏的病变 HE染色 A: 豆状囊尾蚴在肝脏形成包囊x200; B: 脑神经元内多处包涵体x400 C：肾小管结构模糊，破坏x200; D: 肾小管上皮从基底膜脱落x400  囊尾蚴感染后肝脏的病理变化可分为一般性变化和特征性变化两种。一般性病理变化主要表现为肝细胞变性与间质性肝炎。颗粒变性：表现为肝细胞肿大，肝细胞中有蛋白性颗粒，肝窦隙变小。水泡变性：肝脏细胞肿大，细胞质有些溶解，较为透亮，但细胞核的位置多无改变，肝窦隙变小。脂肪变性：有程度不等的脂肪滴。脂肪变性和颗粒变性常见于同一肝脏。间质病变：表现为程度不等的间质性肝炎，在汇管区或小叶间有结缔组织增生和灶状淋巴细胞浸润，小叶间静脉扩张。小叶间胆管都有程度不等的增生，其数量增加。胆管上皮增生，单层变成两层甚至复层，胆管黏膜上皮变厚，胆管周围结缔组织明显增生，呈慢性胆管炎与胆管周围炎。特征性病理变化是肝组织形成肉芽肿。可能是幼虫移行对肝细胞造成损伤后在局部发生的慢性炎症反应。幼虫移行造成肝细胞坏死和少量出血，接着局部上皮样细胞增生，其间有异物巨细胞以及多少不等的中性粒细胞浸润。这些中性粒细胞大多在结节外侧分布，在肉芽肿外围是结缔组织构成的包囊， 包囊内分布着许多空壳样结构以及均质红染的椭圆形的虫卵。 肾脏的病变主要集中在大量的肾小管上皮从基底膜上脱落，肾小球囊腔变大，肾小球萎缩变