地黄根区土壤水提取物对地黄保护酶活性与膜质过氧化的影响.docVIP

地黄根区土壤水提取物对地黄保护酶活性和膜质过氧化的影响 2 试验材料和方法 2.1试验材料 供试地黄品种为河南焦作市广泛种植的温85-5。以其无性块根（称“种栽”）作为再繁材料，生产上称做“倒栽留种”。 2.2试验方法 本研究于2007年3月中旬在福建农林大学可控温室中施行砂培盆栽试验，采用外源添加地黄根区土壤水浸提液（简称“DHW”）的方法进行模拟连作。根据试验前期筛选的生物测试浓度，选择-1g/mL、0.2 g/mL、1 g/mL、2 g/mL 四个水浸提液浓度，进行平行处理，根据种栽数量设置n≥3次重复，每盆砂量为2000mL，砂厚度为7cm，每盆移栽经过草木灰消毒处理并已长出幼芽的3cm长且粗细均匀的地黄根段，定植5株。按Hoagland营养液配方进行全营养培养，定期添加，直至地黄叶片开始充分展开（两周后），此时，配合营养液的添加量，按上述浓度梯度一次性添加地黄根区土水浸提浓缩液，分别于处理两周后进行光合作用指标、生理生化指标的测定以及形态指标观察。 2.3取样方法 本试验于地黄苗期进行，取样方法是将地黄分为地上部叶片和地下部新生成的须根系两部分，分别进行相关指标的测定，并按照实验要求留样备份。 2.4 实验项目 按照实验安排分别依次进行丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量的测定以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、过氧化物酶(peroxidase，POD)、过氧化氢酶(catalase，CAT)、苯丙氨酸解氨酶（PAL）、吲哚乙酸氧化酶（IAAO）等抗性相关酶活性的测定。 2.4.2相关酶活性及MDA含量测定 分别取标记地黄叶片1.0g或和新生根系1.0g，采用1600型紫外-可见分光光度计进行下列项目的测定。 （1）根系活力（根系脱氢酶活性）的测定 采用氯化三苯基四氮唑（TTC）法测定地黄根系活力，测定485nm处OD值，以TTC还原量表示根系活力（g/g·hFW）。 （2）POD活性的测定 参照张志良等的方法测定[64]SOD活性的测定 参照朱广廉等的方法[62]。[63]，测定液于240nm处比色，以每分钟内OD240变化值表示酶活性大小（U/g·minFW）。 （5）MDA含量的测定 参照朱广廉等的方法[62]。测定值，按公式C= 6.45（OD532- OD600）-0.56OD450计算MDA含量 图３．不同浓度土壤水提取物对过氧化物酶活性的影响 Figure1.Effects of various concentration of soil extractors on POD activity of Radix Rehmanniae 3.2.3 DHW对SOD活性的影响 氧自由基属于活性氧的一种，具有很强的氧化能力，可引发膜脂过氧化作用，破坏膜的完整性。而SOD能催化超氧自由基，产生歧化反应，生成分子氧和过氧化氢，保护膜的完整性。SOD酶活性高或升高，说明植物对逆境的存在一定的抵御能力。本实验发现，所设不同浓度的DHW与对照相比先促进SOD酶的活性（112.6%），后又降低（77.2%，64.2%），甚至低于对照（图4）。这说明在一定处理时间内，地黄幼苗可以启动自身防御机制，但超出一定范围后，可能会引起不利的反应，如导致抗氧化系统的紊乱，酶活性降低，甚至失活。 图４．不同浓度土壤水提取物对超氧化物歧化酶活性的影响 Figure1.Effects of various concentration of soil extractors on SOD activity of Radix Rehmanniae 3.2.4 DHW对CAT活性的影响 SOD在清除超氧化物阴离子自由基的过程中，形成对细胞有危害作用的H2O2，CAT具有清除反应中的H2O2的作用，与上述两种酶一起，保护膜系统免受自由基的危害。不同浓度的DHW处理后，CAT表现随浓度的增加先升高后降低（131%、115.9%、75.7%，图4）。说明低浓度的DHW在短时间内可促进幼苗对自身的积极保护作用，表现出活性升高，随处理时间的延长及处理浓度的增大，幼苗的逆境胁迫程度加大，化感强度加大，最终消弱抵抗能力，表现出CAT活性的降低。 图５．不同浓度土壤水提取物对过氧化氢酶活性的影响 Figure1.Effects of various concentration of soil extractors on CAT activity of Radix Rehmanniae 3.2.5 DHW对膜质过氧化的影响 对受体植物而言，毒性化感物质处理造成了一种逆境。对这种逆境的响应程度与受体植物的防御能力有关。一般说来，逆境胁迫使体内产生自由基，使膜质过氧化并导致细胞膜受到伤害。丙二醛（MDA）是自由基启动的膜质