临床生化实验方法的选择和评价.ppt

1、方法的分级 1）决定性方法（definitive method ） 准确度最高，系统误差最小，与真值最接近， 需要精密仪器，高纯度的试剂用途：用于发展及评价参考方法和一级标准品。缺点：技术要求太高，费用昂贵，设备要求高，测定时间长 3）常规方法（routine method ） ： 　　性能指标符合临床或其他目的的需要，有足够的灵敏度、准确度和特异性，有适当的分析范围，经济适用。这类方法经有关学术组织认可后可称为推荐方法（recommended method ）。 （2）可靠性 一般具有较高的精密度和准确度，以及较大的检测能力。 2）选定侯选方法 经初步选定的方法称为候选方法。候选方法确定后，应该写出该法的原理与参考文献，所用仪器、试剂的来源、牌号、纯度（或配套试剂盒），标本收集要求，详细的操作步骤，标准曲线和结果计算，文献中列出的性能指标，参考值与参考范围，以及其它应注意的事项与安全防护措施等。  3）进行初步试验 为了实用的目的，初试应该包括 ①标准曲线及其重复性； ②质控血清或新鲜标本的重复试验； ③分析待测物浓度不同的标本，与公认的参考方法的测定值作对比； ④要有足够的试验证明仪器与试剂能符合要求。 3、方法学评价指标： 1）准确度：测定值与真值之间的符合程度。 2）精密度：对同一标本用同一方法在同样条件下多次重复测定，所得各次结果之间的符合程度。 3）灵敏度：化学反应中能检出的最小量。 4）特异性：分析测定中只对某一成分起反应，其他物质对反应毫无影响或基本无影响。 5）线性范围：实验方法所能检测标本中某物质的浓度范围。 注意事项： 吸量准确； 加入标准液后，其实验样品的被子测浓度最好达到医学决定水平； 总浓度必须在方法分析范围内； 需加入高中低不同浓度回收试验，计算平均回收率； 加入标准液的体积一般在10%内； 重复2-3次。 注意事项 被试验的物质：胆红素、溶血、防腐剂、抗凝剂、药物等 可疑干扰物的浓度：干扰物浓度有可能达到病理标本最高浓度值。 本试验检测的误差包括方法特异度不高和干扰物作用引起的误差。 消除干扰常用方法 空白对照：试剂空白：常见 　　　　　　　标本空白： 物理、化学方法分离干扰物 双波长或多波长法检测排除干扰 误差较大又无法消除，则改进或更换方法。 (四)方法比较试验（对比试验） 用于检测候选方法的系统分析误差。对所得数据进行分析，可提供系统误差的性质（恒定或／和比例误差） 对一组病人的标本用候选方法和比较方法同时进行分析测定，观察二者之间的差异。这是考验候选方法是否可采用的重要措施。 ①在进行临床化学常规方法的评价时，最好选择参考方法作为比较方法 ②若采用已知偏差法，则有部分误差来自比较方法（与已知偏差 一致的那部分误差），剩余的则属于侯选方法。 ③若采用未知偏差法，分析误差可能来源于二者之一或两者都有，难以分析。 注意事项： ①正确选择受检对象，以受检对象的确对所反映的总体具有代表性和不存在对指标具有影响的因素为原则； ②合理规定参考人群的条件，如年龄、性别、民族、职业、女性的月经期、妊娠和哺乳，以及标本采集的时间和地区因素等； ③保证一定数量的受检人数，一般应有100例以上，若指标分布呈偏态时应在120例以上，特殊情况至少也应30例以上； ④测定方法应标准化，保证测定结果的可靠性和可比性。 ⑤根据专业知识确定单、双侧位界，严格按照统计要求进行测定结果的处理。 参考值在临床应用中应注意的问题 ①参考值的使用有一定的范围，仅适合于符合参考个体要求的参考人群。 ②参考值范围通常定为 ±2S，有时称为95%可信区间，即此范围仅覆盖研究人群的95%，因此，参考值范围不能盲目地作为正常与疾病的分界点。 ③综合评价，参考值在作为诊断和监测目的使用时，应注意年龄、性别、饮食、药物、个人习惯和体力锻炼等因素的影响。 一个诊断试验一般确定三个决定水平： ①提示需要制定进一步检查计划的阈值，相当于待诊值； ②提示需要采取治疗措施的界值，相当于确诊值； ③提示预后或需要紧急处理的界值。 ALT (U/L) 5～30 20 60 300 2）制订 （１）参考个体的选择 （２）测定方法的选择与标准化 （３）参考值及其范围的确定 单值估计：过高为异常，以单值上限为参考值界限 区间估计：过高和过低均为异常，制定参考值上、下限 2、医学决定水平 是一限值，可用来排除或确定某一临床情况或预后将会出现某一生理变化现象 * * 临床生化实验方 法的选择和评价 对于现代化临床化学实验室来说，不但要准确报告实验数据，还要了解实验数据的处理、考核和评价实验方法，正确解释和应用实验数据。 一、实验方法的选择 (一)实验方法和标准品的分级