大连理工大学考研生物化学专业课授课教案.docVIP

课程教案（2） 一、考点 理解分子生物学的中心法则 DNA复制的特点 DNA复制的过程和酶及参与因子 真核生物DNA复制的特点 反转录作用及端粒酶 DNA的修复方式 RNA的转录作用及其特点 RNA聚合酶 启动子及转录终止信号 10、RNA的转录过程 11、转录后的加工过程 12、RNA的选择性剪接 13、转录的抑制剂 14、核酶 15、蛋白质合成体系 16、蛋白质合成的过程 17、蛋白质生物合成的干扰和抑制 二、重点剖析 1、中心法则 中心法则：是指遗传信息在分子水平上的传递规律，主要是DNA→DNA，DNA→RNA→蛋白质，在病毒还可由RNA→DNA（反转录）或RNA→RNA（RNA复制） 2、DNA复制的特点 （1）半保留复制（包括半保留复制的实验依据） 半保留复制：DNA复制时，以亲代DNA的两条链分别作为模板，在DNA聚合酶的催化下，按碱基互补的原则合成两条与模板链互补的新链，组成新的DNA分子。新形成的两个DNA分子与亲代DNA分子的碱基顺序完全一样。由于子代DNA分子中一条链来自亲代，而另一条链是新合成的，因此这种复制方式称为半保留复制 1958年，Meselson和Stahl用15N标记E.coli. DNA，证明了DNA的复制是半保留复制 （2）复制的起始点与方向 ①复制叉：DNA分子复制时，在亲代分子的一个特定区域内双链打开，随之以双链为模板复制生成两个子代DNA双链分子。开始时，复制起始点呈现一叉形(或Y形)，称为复制叉，随复制进行，复制叉向前移动 ②复制子：基因组能独立进行复制的单位，称为复制子。每个复制子都含有控制复制起始的起点和控制复制终止的终止点 ③复制起点 DNA复制要从DNA分子的特定部位开始，此特定部位称为复制起点。在原核生物中复制起始点常位于染色体的一个特定部位，即只有一个起始点。真核生物的染色体在几个特定部位进行DNA复制，有多个复制起点 ④复制的方向（设计实验判断复制是单向还是双向） 复制的方向：从一个起始点开始，以同一方向生长出两条链，形成一个复制叉，称为单向复制。从一个起始点开始，沿两个相反的方向各生长出两条链，形成两个复制叉，这种方式最为常见，称为双向复制 用放射自显影实验判断DNA的复制方向及速度，用低放射性3H-脱氧胸苷短期标记，再用高放射性3H-脱氧胸苷标记，若为单向，一侧高，另一侧低。若为双向，中间低，两侧高 （3）半不连续复制（如何证明DNA复制的半不连续性） ①半不连续复制：DNA的双螺旋结构中的两条链是反向平行的，当复制开始解链时，亲代DNA分子中一条母链的方向为5’→3’，另一条母链的方向为3’→5’。DNA聚合酶只能催化5’→3’合成方向。在以3’→5’方向的母链为模板时，复制合成出一条5’→3’方向的前导链。而以5’→3’DNA链为模板只能合成若干反向互补的冈崎片段，这些片段再连成滞后链。由于前导链的合成连续进行的，而滞后链的合成是不连续进行的，所以从总体上看DNA的复制是半不连续复制 ②前导链：亲代DNA分子中一条母链的方向为5’→3’，另一条母链的方向为3’→5’。DNA聚合酶只能催化5’→3’合成方向。在以3’→5’方向的母链为模板时，复制合成出一条5’→3’方向的前导链，前导链的前进方向与复制叉的行进方向一致，前导链的合成是连续进行的 ③滞后链：DNA复制时，两条链均作为模板，合成新链的方向均为5’→3’。因此，以5’→3’DNA链为模板合成的互补新链不能沿着5’→3’方向连续合成，只能随着DNA双链的打开，依次合成5’→3’方向的DNA短片段（冈崎片段），再连成长的DNA链，因该链合成较前导链滞后，故又名滞后链。滞后链合成方向与复制叉的前进方向相反 ④冈崎片段：DNA在复制时，由滞后链所形成的一些子代DNA短链称为冈崎片段。冈崎片段的长度，在原核生物中约为1000~2000个核苷酸，相当于一个顺反子的大小。而真核生物中约为100~200个核苷酸，约等于一个核小体DNA的长度 ⑤相关实验： 以E.coli为材料，在培养时，培养基中加入同位素[3H]标记的，经30秒后，DNA开始复制，分离DNA，然后在碱中沉淀，变性，让新合成的单链和分开，再用CsCl密度梯度离心，以沉降的快慢来确定片段的大小，再检测放射标记，结果表明被3H标记的片段，也就是新合成的片段，沉淀系数为20S左右，即都是长1000~2000的DNA片段，而亲本链要比它大20~50倍DNA分子超螺旋的构象变化及双螺旋的解链，将复制的模板展现出来。第二阶段为复制的引发阶段，由引物RNA进行5’→3’方向的合成。第三阶段为DNA链的延长，在引物RNA合成基础上，进行DNA链的5’→3’方向合成，前导链连续地合成出一条长链，滞后链合成出冈崎片段。去除RNA引物后，片段间形成了空隙，DNA聚合酶作