牛血清白蛋白变性复性过程及部分折叠中间体研究.pdfVIP

中文摘要 本文应用荧光相图法和高效疏水色谱研究脲和盐酸胍诱导牛血清白蛋白变 性过程及其复性过程的路径，捕捉变性、复性过程中存在的部分折叠中间态；应 用高效体积排阻色谱和十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳(sDS．PAGE)研究 在脲和盐酸胍变性牛血清白蛋白复性过程中聚集体的形成及成因。本论文的研究 结果将为研究蛋白质折叠机理，建立统一的蛋白质折叠模型奠定基础。 荧光相图法研究牛血清白蛋白变性和复性过程，捕捉部分折叠中间态。结果 表明：脲诱导牛血清白蛋白变性过程中，当有还原剂存在时，牛衄清白蛋白直接 从天然态转变为去折叠态，没有中间态存在；当无还原荆存在时，存在一个部分 折叠中间态。盐酸胍诱导牛血清白蛋白变性过程，在有还原剂和无还原剂的条件 下都符合“四态模型”，存在两个中间态。但形成中间态所需的盐酸胍浓度不同。 非还原盐酸胍变性牛血清白蛋白的复性过程中存在两个复性中间态；非还原脲变 性牛血清白蛋白的复性过程中存在一个复性中间态。而还原脲和盐酸胍变性牛血 清白蛋白的复性过程中都存在三个部分折叠中间态，分四步进行。 用色谱法对非还原和还原脲变性牛血清白蛋白体外折叠中间体及复性聚集 体进行了分离。发现对于非还原脲变性牛血清白蛋白，在高效疏水色谱上进行复 性，发现其再折叠过程中存在一个部分折叠中间态，它的保留时间比天然牛血清 白蛋白长，因此比天然牛血清白蛋白的疏水性要强。在体积排阻色谱柱中能成功 恢复其天然构象，复性过程中无聚集体存在。对于还原脲变性牛血清白蛋白，在 疏水色谱上形成聚集体，无法成功复性。在体积排阻色谱柱中也大部分以聚集体 的形式存在。 用非还原和还原SDS．聚丙烯酰胺电泳研究脲变性牛血清白蛋白在脲溶液中 稀释复性时聚集体形成的原因。发现非还原脲变性牛血清白蛋白在稀释复性过程 中由于分子间二硫键的错配形成聚集体。还原变性牛血清白蛋白在稀释复性过程 中也会形成聚集体，当复性液中脲浓度很低时，会形成沉淀。经电泳分析这些聚 集体是由于疏水性很强的还原变性牛血清白蛋白分子洲的疏水作用导致变性蛋 白质分子大量聚集、沉淀。 综合以上实验结果可以得出以卜结论：(I)对于牛血清广]蛋白的变性过程， 还原脲变性过程符合“两态模型”；非还原脲变性过程符合“三态模型”；而牛 血清白蛋白的非还原和还原盐酸胍变性过程都符合“四态模型”。 (II)对于牛 血清白蛋白的复性过程，非还原脲变性牛血清白蛋白的复性过程符合“三态模 型”：非还原盐酸胍变性牛血清白蛋白的复性过程符合“四态模型”；脲和盐酸胍 还原变性牛血清白蛋白的复性过程都存在三个部分折叠中间态。n11)脲非还原 变性牛血清白蛋白的复性过程中，存在一个复性中间态，其疏水性比天然牛血清 白蛋白强。在其稀释复性过程中，由于分子问二硫键错配牛血清白蛋白分子形成 聚集体。(Ⅳ)在脲还原变性牛血清白蛋白的复性过程中，由于还原变性牛血清 白蛋白具有很强的疏水性，在其稀释复性过程中，牛血清白蛋白分子通过分子间 疏水作用形成聚集体，甚至沉淀。 关键词： 牛血清白蛋白；变性；复性；中间态：聚集体：荧光光谱法；荧光相 图法；高效疏水色谱；高效体积排阻色谱 Abstract existcnceof The aIld ofboVinesenlmalbuminsandthe unfoldingrefolding wefe nuorescencc and inte姗ediate phase higll stages investigatedby diagram interaction andhow aggrcgatesthey perf0彻ancehydrophobicchmmato争aphy，BSA the werestudied