农药残留检测的荧光和化学发光免疫分析方法的研究.pdf

摘 要 在课题组现有ELISA分析方法的研究基础上，进一步深化研究方法的相关 影响因素，如基质效应、漂移现象及不同ELISA分析方法等。在ELISA三种包 被模式研究中，结果显示包被抗体法和包被二抗法在分析方法的方法灵敏度和数 据平行性方面较包被抗原法更有优势。为建立具更高灵敏度且可商品化开发的免 疫分析方法，本文对时间分辨荧光分析方法(TRFIA)和化学发光酶免疫分析方 法(CLEIA)进行了系统的研究。 值等条件的筛选，得到了对于Eu3+和Sm3+这两种稀土离子具有良好性能的荧光 增强液。在此基础上，通过对包被温度和时间、包被缓冲液、封闭物质、反应缓 冲液等条件的优化。在优化基础上，建立了克百威的TRFIA分析方法并进行了 标样添加回收率。结果表明，所建立的克百威TRFIA分析方法的检测灵敏度为 1．86 ng／mL，样品添加回收率试验表明建立的克百威TRFIA分析方法可用于样品 中克百威残留检测。 通过对CLEIA化学发光增敏液中缓冲体系、发光增强剂、鲁米诺浓度及氧 化剂浓度的筛选，得到具有良好性能的发光增敏液。在此基础上，通过对化学发 光板、包被温度和时间、包被缓冲液、反应缓冲液及有机溶剂与浓度等条件的优 化，结果显示：Costar白色发光板的吸附效果较佳，克百威抗体选择用O．1M，pH7．2 Tris．HCl液作为包被缓冲液并在并在37。C包被两小时效果为佳，封闭物质选用1 ％胰蛋白胨(Tyrtone)且反应缓冲液选择0．05M，pH7．2Tris．HCI液可得到最好的 反应灵敏度和最大发光计数，有机溶剂中甲醇对CLEIA影响最小，反应体系中 最终含量2．5％为佳。在此基础上，建立了克百威的CLEIA分析方法，其检测限 (IClo)为O．362 ng／mL，检测灵敏度(IC50)为4．244ng／mL，并通过LC—MS／MS 数据确证。结果表明克百威CLEIA分析方法在灵敏度方面明显优于ELISA分析 方法，并在样品检测中得到很好的应用，对多种样品的检测限已达到相关国家及 CAC等设定的克百威MRL值。 在构建成功化学发光免疫分析系统基础上，进一步将CLEIA分析方法应用 VIII 到三唑磷、毒死蜱和对硫磷三种有机磷农药残留分析技术中，建立的三唑磷，毒 2．247 ng／mL，IClo值分别为0．063、0．694和0．203ng／mL。并分别与三种农药的 ELISA分析方法的检测灵敏度和检测限进行比较，结果显示，CLEIA分析方法 的检测限均有了较大的提高，特别是三唑磷的CLEIA分析方法，相比于ELISA 分析方法其检测灵敏度和检测限提高了2个数量级，显示出CLEIA分析方法在 农药残留检测方面应用的良好前景。 关键词：克百威，残留分析，酶联免疫分析方法(ELISA)，时间分辨荧光免疫 分析方法(TRFIA)，化学发光酶免疫分析方法(CLEIA) IX ABSTRACT ofthe aboutthe Onthebasis researchoftheauthor’S ELISA existing laboratory abouttheeffectofvariousfactorswhich matrix method，in-depthstudy including effect，drift anddifferentELISA formatstoELISAmethodwas phenomenon coating of differentELISAformatsshowedthat coated investigated．Comparison