动物组织切片制作技术.pptVIP

动物组织标本制作技术 （五）、火棉胶包埋法 火棉胶常用于大块组织的包埋。课避免纤维组织和肌肉组织的过度硬化，减少纤维组织的收缩和扭转，利于保持原有的组织结构。 （六）、树脂包埋法 树脂包埋法适用于不脱钙骨髓活检组织，肝、肾穿刺活检和淋巴组织等，可观察细胞的细微结构。树脂选用亲水性甲基丙烯酸-2-羟基乙基酯，组织不需脱水，对细胞形态影响轻。 五、 切片 石蜡切片是以石蜡作为组织的支持媒介制作切片的。 切片前的处理： A:修切蜡块： 切片前应先修块，即切去组织周围过多的石蜡，一般留下至少约2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留得太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却一定时间。 B:切片用品准备 （1）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换 新的一次性切片，切片刀对组织块的倾角非常重要，一般在10°以内，过小则组织块不能先与刀刃的刀口接触，过大时，使刀口刮组织蜡块表面，切片易碎。 （2）载物片：载物片经清洁液、95%乙醇处理后备用。 （3）展片仪：加入温水，接通电源，调整温度 （4）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、等。 六、 粘片 粘片的目的是将石蜡切片粘附在载玻片上，借水的张力和一定的温度，使略皱的蜡片伸展平整，以便染色和镜检。 粘片有两种方式：水捞法——将一个盛水的容器加热至35-40°，将蜡带光泽面向下铺于温水上，待蜡片伸展平整后，即可用长镊子分离每一个蜡片，再用载玻片伸入水中，从蜡片下面捞起，直立玻片使水流掉并置温箱内烘干。 干粘法——可将已经切离的蜡片单个的放在加有数滴蒸馏水的载玻片上，然后在酒精灯上摇晃烘烤，此时应注意控制水的温度勿使过高，待蜡片平整后，倾去玻片上的水，用细针调正蜡片的位置，继续在酒精灯上烘烤至蜡片呈半透明状为止，以后在温箱内烘干即可。当蜡片已放在有水的载玻片上后，可不经酒精灯烘烤，而在调好温度的电热板上烘烤。 第三章：染料、常用染液及常规苏木素-伊红染色法 一、 染料性质 染料：含有发色团的有机化合物 盐类物质 溶解于水并具有电荷 组织着色 碱性染料：具有阳电荷。含氨基（-NH2)、 二甲氨基〔-N(CH3)2〕等碱性助色团。 酸性染料：具有阴电荷。含羧基（-OOH）、 羟基（-OH）或磺基（-SO3H） 等酸性助色团。 二、染色原理： 嗜碱性：细胞和组织中的酸性物质或结构（嗜碱性物质）与碱性染料亲和力强。 嗜酸性：细胞和组织中的碱性物质或结构（嗜酸性物质）与酸性染料亲和力强。 中性：与两种染料的亲和力均不强。 在组织染色中所谓的“嗜酸性”及“嗜碱性”一词，是说该物质易被酸性或碱性染料所染，而细胞本身的酸性或碱性正与其相反。 三、常用染液及染色法： 1、细胞核常用染色法 A：苏木精-苏木精是从苏木用乙醚连续提取的淡黄色或棕黄色结晶，溶于酒精，甘油及热水中。苏木精不能单独使用，主要是对组织的亲和力小，欲使其成为一种染料，必须在苏木精溶液中加入复盐和氧化剂。配制苏木精的常用氧化剂有过锰酸钾、氧化汞、碘酸钠及过氧化氢等，或将配置好的苏木精在空气中自然氧化，所以放置时间较长的苏木精染液染色效果较好。 B：硫堇或甲苯胺蓝染色法-切片入1%硫堇或甲苯胺蓝水溶液染12-24h，然后95%酒精分色，结果：核蓝色，粘液，软骨基质，肥大细胞颗粒呈蓝紫色。 C：碱性品红-碱性品红对显示多数糖类及弹性纤维效果良好，也可显示核酸。作为细胞核的一般染色，可用0.5-1%水溶液染色数分钟。 D：媒染染料细胞核染色法-指在配制染料时需加入一些媒染剂如氯化铝，铝矾等类似的复盐才易着色。如天青石蓝B染色法：天青石蓝B0.1克，铁矾5克，蒸馏水100ml，混合后煮沸数分钟，冷后过滤，切片染2-3分钟，此液可代替苏木精染细胞核。 2、细胞质常用染色法 A：伊红-伊红种类很多，但常用为伊红B和伊红Y。同时一般均配成0.5-1%水溶液或酒精溶液，在染蓝色核后，经伊红复染，最后用95%酒精分色。 B：酸性品红-酸性品红常用于结缔组织染色，染色后色泽鲜艳，缺点是易于退色，不易长久保持。 C：藻红-使用法与伊红相同。 D：焰红-使用法与伊红相同。 * * 第一章：取材及固定 一、 动物致死法 1、麻醉法 可将浸有乙醚或氯仿的棉球连同小动物一起密封于钟罩或有盖玻璃瓶内进行麻醉；也可用4%戊巴比妥作静脉注射，剂量按动物体重1ml/kg；或用20%氨基甲酸乙脂作腹腔注射，剂量一般按动物体重5ml/kg。 2、空气栓塞法 如家