3G基础知识（WCDMA无线原理和关键技术）.ppt

课程目标 学完本课程，您将能够： 了解3G的发展情况 了解WCDMA无线原理 了解WCDMA关键技术 课程内容 课程内容 信道编码 信道编码的原理 信道编码和交织技术的使用 课程内容 功率控制 功率控制 功率控制效果 下行链路功率控制目的 节约基站的功率资源，减少对其他基站的干扰 上行链路功率控制目的 克服远近效应，所有的信号到达基站的功率相同 切换技术 压缩模式 接纳控制过程 当用户发起接入呼叫申请资源时，RNC进行呼叫接纳控制 负载控制 RAKE接收 多径示意图 RAKE接收 RAKE接收 本文观看结束！！！ 5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2 mRNA表达的影响 组织因子途径移植物2(tissue factor pathway inhibitor， TFPI-2)是丝氨酸蛋白酶抑制物，在调控肿瘤细胞浸润转移方面起着重要作用。目前，关于TFPI-2在食管癌中的基因表达情况的分析研究尚少。本研究旨在探讨TFPI-2基因的失活机制，并寻找食管癌治疗的新靶点。 1　材料与方法 1.1　材料 RPMI-1640培养基购自北京索莱宝生物科技有限公司;标准胎牛血清购自天津市灏洋生物制品科技有限公司;Trizol试剂购自MBI公司;RT-PCR试剂盒购自MBI公司;5-Aza-CdR购自Sigma公司;人食管癌细胞株Eca9706由郑州大学肿瘤生物学研究室惠赠。 1.2　细胞培养和药物处理 人食管癌细胞Eca9706以含10 mL/L胎牛血清的RPMI-1640培养基，37 ℃、50 mL/L CO2培养箱培养，每2～3 d消化传代1次。 1.3　MTT法检测干预前后细胞增长率的变化 取对数生长期细胞，调整密度至5×104/mL接种于96孔板，按5-Aza-CdR浓度分为6组：0、0.4、1.6、6.4、25.6、102.4 μmol/L，每组复设5个孔。待细胞贴壁后，分别于24、48、72 h后加入MTT液，4 h后弃去上清液，每孔加DMSO 150 μL，在490 nm波长测定各孔吸光度值(absorbance，A)。细胞增殖抑制率(cellular proliferation inhibition rate， CPIR)按公式计算：CPIR=(1-实验组A均值/对照组A均值)×100%。 1.4　流式细胞仪(FCM)检测干预前后细胞凋亡率的变化 取对数生长期细胞，按5×105/mL的密度接种于6孔板内，待细胞贴壁后加药，分组如下：对照组(0 μmol/L),1.6 μmol/L 5-Aza-CdR组，25.6 μmol/L 5-Aza-CdR组，102.4 μmol/L 5-Aza-CdR组。每组均于5-Aza-CdR作用48 h后消化收集细胞，700 mL/L冰乙醇固定，流式细胞仪进行细胞凋亡测定。 1.5　RT-PCR技术检测TFPI-2基因mRNA的表达 分组同FCM，每组细胞均5-Aza-CdR作用48 h。TFPI-2的上、下游引物分别为5′-GTCGATTCTGCTGTTTTCC-3′和5′-ATGGAATTTTC TTTGGTGCG-3′，合成产物为440 bp;β-actin作为内参照，上下游引物分别为5′-AGGCATTGTGATGGACTCCG-3′和5′-AGTGATGACCTGGCCGTCAG-3′，合成产物为301 bp。按照试剂盒说明书，用Trizol试剂提取细胞总RNA，经紫外分光光度计分析后，按Sigma公司RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit说明书操作。先逆转录制备单链cDNA，再以逆转录产物为模板，用上、下游产物进行PCR反应扩增目的基因。反应条件为：94 ℃预变性3 min，然后94 ℃变性30 s,51 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s，循环30次，最后72 ℃延伸5 min,4 ℃保温。扩增片段经20 g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定。 1.6　免疫组化方法检测TFPI-2蛋白的表达 取对数生长期细胞，按5×104/mL的密度接种于经预处理的盖玻片上，待细胞贴壁后加药(分组同RT-PCR)。培养48 h后加入40 g/L多聚甲醛溶液固定30 min,30 mL/L H2O2封闭内源性过氧化物酶，室温下10 min,100 mL/L动物血清封闭，室温下10 min，滴加1∶100的稀释的TFPI-2抗体4 ℃过夜，二抗室温下1 h，滴加辣根酶标记链霉卵白素，37 ℃孵育30 min，DAB显色，苏木精复染，脱水透明封片。另取爬片滴加PBS 液代替一抗作为阴性对照。结果判定：TFPI-2蛋白阳性信