基础生化2012第一章 蛋白质.ppt

亲和层析 5.特殊亲和力 返回节 四、Pr纯度的测定 电泳法 末端化学测定法 HPLC法 质谱法 名词解释 pI 简单蛋白和缀合蛋白 蛋白质变性 变构效应（别构效应） 简答题 1.简述标准氨基酸的结构特点及其分类。 2.蛋白质沉淀的因素有哪些，原理是什么？ 3.简述蛋白质结构的层次性。 4.维持蛋白质结构的作用力有哪些？ 思考题 简述Gly的特点及其在蛋白质结构中的作用。His有什么生理意义? 羊毛衫等羊毛制品在热水中洗后在电干燥器内干燥则收缩。但丝织品进行同样处理却不收缩。如何解释？ 为什么在球蛋白内部和外部都可发现Gly和Ala？另外，在球蛋白质内部还是外部能找到Cys？ * 蛋白质的紫外吸收峰在280nm * 氨氨基酸均含有一个手性?-碳原子 * 氨基酸所带的电荷取决于什么？ * 氨基酸所带的电荷取决于什么？ * 目前多用DNS代替Sanger试剂。 * 胜鍵 看似單鍵，但 C-N 鍵旁的 C=O 雙鍵會與它產生共振，因此具有雙鍵的性質；且中心的 C 與 N 原子都是使用 sp2 軌道，因此其前後六個原子都躺在同一平面上，稱為胜平面 (如上圖虛線所圍起)。注意每一個胺基酸的中心是 a 碳，而兩個 a 碳之間是以胜平面連在一起，因此蛋白質可以說是由許多胜平面以 a 碳為接點連成的。 * 胜鍵 看似單鍵，但 C-N 鍵旁的 C=O 雙鍵會與它產生共振，因此具有雙鍵的性質；且中心的 C 與 N 原子都是使用 sp2 軌道，因此其前後六個原子都躺在同一平面上，稱為胜平面 (如上圖虛線所圍起)。注意每一個胺基酸的中心是 a 碳，而兩個 a 碳之間是以胜平面連在一起，因此蛋白質可以說是由許多胜平面以 a 碳為接點連成的。 * * * 铁原子与卟啉环平面相对位置的改变 P75 四级结构：4个亚基分布在四面体的4个角，链间以离子键结合，有中央空穴。 α和β亚基形成二聚体αβ ，二聚体内结合紧密、二聚体间结合疏松。 3.Hb的四级结构 P75 α2β2 （三）Hb的别构效应 一条链氧合后Fe的微小移动，牵动HisF8连同F螺旋段发生位移，再波及附近肽段构象，造成两个α亚基间盐键断裂，Hb的三级结构随之改变，2个αβ二聚体之间相对移动发生错位、四级结构随之改变。 构象的改变促进第二亚基的氧合，此种一个亚基的别构作用，促进另一亚基变构的现象，称为亚基间的协同效应。 别构效应通过分子的构象变化来实现。 Hb两种主要的构象状态： R态（氧合Hb的优势构象）和T态（去氧Hb的优势构象） 各亚基间依靠次级健联系，使整个分子呈球形，这些次级键对于维系Hb分子空间构象有重要作用。 T态借助于盐桥被稳定。 T态亚基间8对盐桥 在4亚基间的8对盐键，它们的形成和断裂使整个分子的空间构象发生变化。 P78 Pr的结构和功能 一级结构是基础 高级结构直接决定功能 但近年来发现了一些固有无折叠的蛋白质， 它们松散存在但仍有活性。 返回章 第五节 蛋白质的性质及研究方法 一、Pr的理化性质 二、Pr一级结构的测定 三、Pr的分离、纯化和分析 四、Pr纯度的测定 一、Pr的理化性质 （一）紫外吸收 （二）两性解离 （三）胶体性质 （四）沉淀反应 （五）Pr变性 （六） Pr水解（自学） （七） Pr的颜色反应（自学） （一）紫外吸收 280nm （二）两性解离 主要是可解离的侧链基团。 等电点、等离子点 P31 1.蛋白质溶液具有胶体溶液的典型性质: 如丁达尔现象；布郎运动；不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。 （三）胶体性质 2.蛋白质胶体溶液的稳定性决定于： 质点的大小 所带的电荷 水化作用 P31 （1）盐析 （2）pI沉淀： （3）有机溶剂 （4）重金属 （5）生物碱试剂 和某些酸 （6）加热 1.沉淀因素 （四）Pr沉淀作用 P31 水化层 同种电荷 水化层、降低介电常数 pH大于pI时，带负电的Pr与其结合 pH小于pI时，带正电的Pr与其结合 热变性导致构象解体，疏水基团外露，破坏水化层。 在温和条件下，通过改变溶液的pH或电荷状况，使蛋白质从胶体溶液中沉淀分离。 在沉淀过程中，结构和性质都没有发生变化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性沉淀。 2.可逆沉淀和不可逆 （四）Pr沉淀作用 在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水。 由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，所以又称为变性沉淀。 （五）Pr变性作用 蛋白质受某些物理或化学因素的影响，导致