毛细管电泳76336.pptVIP

本章学习要求： 1. 掌握 药物分析主要新技术的原理。 2. 熟悉 药物分析主要新技术的应用。 3. 了解 药物分析新技术的发展。 第一节 毛细管电泳及其应用 电泳是电介质中带电粒子在电场力作用下，以不同的速度向电荷相反方向迁移的现象。 利用这种现象对化学和生物化学组分进行分离的技术称之为电泳技术。 毛细管电泳（CE）是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。 毛细管电泳与HPLC法相似，均为液相分离技术，有多种分离模式，且仪器操作可自动化，但遵循不同的分离机制。虽然由于CE的工作原理和运行方式所限，CE检出的灵敏度和精密度通常不及HPLC，但是，CE和HPLC的适用范围在很大程度上互为互补。所以，早在2000年USP24中就收录了CE法。自此，毛细管电泳法就相继被国际上主要的药典所收录。这为毛细管电泳在药物分析中更广泛的应用奠定了基础。 CE具有如下优点： 1.高效 理论板数为每米几十万，高者可达几百万乃至几千万，而HPLC一般为几千到几万。 2.高速 最快可在约1分钟内完成分离。 3.微量 只需纳升级的进样量，仅为HPLC的几百分之一。 4.低消耗 只需少量（ml量）溶剂和价格低廉的毛细管。 所以CE也常被称为高效毛细管电泳（HPCE）。 1－温度控制系统；2－高压电源；3－高压电极槽；4－毛细管；5－检测器；6－低压电极槽；7－铂丝电极；8－记录/数据处理 CE的进样方式有压力进样和电动进样。使用的检测器主要为紫外-可见分光光度检测器，此外还有激光诱导荧光检测器，电化学检测器和质谱检测器等。 以下重点介绍毛细管电泳的主要分离模式。 CE的主要分离模式： 采用CE作为药物分离的手段时，首先需要根据待分离物质的存在状态来选择不同的分离模式。 （一）毛细管区带电泳（CZE） CZE是毛细管电泳中最基本，应用最广泛的一种分离模式。主要适用于一离子状态存在的样品。 电泳流：在电解质溶液中，带电粒子在电场作用下，以不同速度向其所带电荷相反方向迁移，产生电泳流 电渗流：CE一般采用的是适应毛细管柱，在一般情况下（pH3）内表面带负电，和溶液接触时形成了一双电层。在高压作用下，双电层中的水合阳离子整体地朝负极方向移动，产生电渗流。 在不考虑相互作用的前提下，离子在毛细管内的运动速度应当是电泳流速度（Vep）和电渗流速度（Veo）的矢量和，即 V=Veo+Vep=（Ueo+Uep）·E 其中，E为电场强度，U为淌度（也称电泳迁移速率，指溶质在单位时间间隔内和单位电场 下移动的距离。） V=Veo+Vep 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 负离子：两种效应的运动方向相反；但电渗流速度一般都大于电泳流速度,故它将在中性粒子之后流出。 各种离子移动速度不同从而实现了分离。 （二）胶束电动毛细管色谱（MECC或MEKC） MECC是采用CZE技术并结合色谱原理而形成，主要用于非离子状态的样品，亦称电中性物质的分离分析。 MECC法的原理是在缓冲液中加入离子型表面活性剂如十二烷基硫酸钠，形成胶束，被分离物质在水和胶束两相分配，各溶质因分配系数的差别而实现分离。 在电场力的作用下，胶束在柱中移动。 负电胶束电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，以较慢的速度向负极移动； 通常疏水性较强的物质与胶束的作用亦较强，结合较稳定，在两相间的分配系数大，相对于疏水性较弱物质的迁移亦较慢，未结合者则随电渗流流出。因此中性物质按疏水性的不同而实现分离。 （三）毛细管凝胶电泳（CGE） CGE是毛细管中装入单体和引发剂引发聚合反应生成凝胶作支持物进行的电泳。 具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。 该方法主要用于分析蛋白质，DNA等生物大分子。 （四）毛细管等速电泳（CITP） （五）毛细管等电聚胶电泳（CIEF） （六）毛细管电色谱（CEC） （七）微芯片毛细管电泳 * * * 毛细管电泳仪 进样系统 分离系统 检测系统 数据处理系统 * * * *