【DNA测序技术】.pptVIP

# DNA测序技术 DNA测序技术的含义 DNA测序技术，又叫基因测序技术。 即为测定DNA序列的技术。在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的主要技术有双脱氧链末端终止法和化学降解法两种方法。目前，Sanger测序法已得到了广泛应用。 DNA测序技术的建立 1963年，Sanger等人第一次完成了胰岛素51个氨基酸的序列测定。 70年代初，sanger建立了第一种直接测定DNA序列的方法——加减法。 70年代后期，Sanger和Maxam等人又分别建立了双脱氧链末端终止法和化学降解法，将该技术推进到“直读”阶段，使核酸序列测定远比蛋白质氨基酸序列测定容易。 加减法 加-减法（plus-minus sequencing）: Sanger于1975年发明，使人们有可能第一次“读”出DNA的碱基序列。 加-减法可分为“加法体系”和“减法体系”。 “加法体系”和“减法体系”的准备工作： 待测DNA的单链作为模板，一个合适的引物，四种dNTP， 用同位素标记； DNA聚合酶从引物开始合成一条互补链； 除去那些未参与合成的dNTP，将剩下的合成产物，分成两 部分； 一部分用于加法系统，一部分用于减法系统。 加法系统：将用于加法系统的产物再分成四小份，每一小份中仅仅将四份中的dNTP的一种加入反应体系