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选修三 现代生物科技专题
基础课时案43 基因工程原理及技术
1.(2015·河北唐山重点中学联考,51)下图是从酵母菌获取某植物需要的某种酶基因的流程,结合所学知识及相关信息回答下列问题。
(1)图中cDNA文库________基因组文库(填“大于”“等于”或者“小于”)。
(2)①过程提取的DNA需要__________的切割,B过程是________。
(3)为在短时间内大量获得目的基因,可用________扩增的方法。目的基因获取之后,需要进行________,其组成必须有__________________________
以及标记基因等,此步骤是基因工程的核心。
(4)将该目的基因导入某双子叶植物细胞,常采用的方法是________,其能否在此植物体内稳定遗传可以用________技术进行检测。
解析 (1)cDNA文库小于基因组文库。(2)提取目的基因需要限制酶,逆转录法获得目的基因需要逆转录酶。(3)短时间内大量获得目的基因,可用PCR技术扩增的方法。基因表达载体的构建必须有目的基因、标记基因、启动子和终止子,基因表达载体的构建是基因工程的核心。(4)将目的基因导入某双子叶植物细胞常采用的方法是农杆菌转化法,目的基因只有整合到植物细胞的染色体上才能在植物体内稳定遗传,可通过DNA分子杂交的方法对目的基因是否整合到染色体上进行检测。
答案 (1)小于 (2)限制酶 反转录(或逆转录)
(3)PCR技术 基因表达载体的构建 启动子、终止子、目的基因 (4)农杆菌转化法 DNA分子杂交
2.下图表示利用基因工程培育抗虫棉的过程,请据图回答下列问题。
(1)若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—↓GATC—,限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—G↓GATCC—,那么在①过程中,应用限制酶________切割质粒,用限制酶________切割抗虫基因。①过程在________(填“体内”或“体外”)进行。
(2)通过②过程得到的大肠杆菌涂布在含有________的培养基上,若大肠杆菌能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒,反之则说明没有导入,该培养基从功能方面属于________培养基。
(3)重组质粒导入大肠杆菌的目的是______________________。
(4)⑤过程所用技术称为________,从遗传学角度来看,根本原因是根细胞具有________________。
解析 (1)由图中目的基因片段两端的碱基序列可知,限制酶Ⅰ可以切割目的基因两端,限制酶Ⅱ能切割右端,故用酶Ⅰ(Ⅰ和Ⅱ)切割可以获得目的基因,质粒上的两个酶切位点,分别在两个抗性基因上,用酶Ⅰ切割,两个抗性基因全被破坏,用酶Ⅱ切割保留一个四环素抗性基因。(2)根据重组质粒与普通质粒上抗性基因的种类可知,该选择培养基中应该添加四环素。(4)⑤是将携带抗虫基因的根细胞培养成植株的过程,该过程为植物组织培养,细胞全能性是该技术的理论基础。
答案 (1)Ⅱ Ⅰ(Ⅰ和Ⅱ) 体外 (2)四环素 选择 (3)大量复制目的基因(抗虫基因) (4)植物组织培养 发育成完整个体的全部遗传物质
3.(2015·福建质检,33)为探究SHH基因与角化囊肿发生的相关性,科研人员利用SHH基因的非模板链转录合成的RNA作为探针,进行分子杂交实验,以检测SHH基因在角化囊肿中的表达情况。其基本流程如下图:(Amp表示氨苄青霉素抗性基因;LacZ基因被SHH基因插入后不表达)
请回答:
(1)重组载体中SHH基因转录合成RNA探针时,________(需要/不需要)启动子。
(2)步骤②中,用Ca2+处理大肠杆菌,使之成为________细胞,然后导入重组载体。实验中,用添加氨苄青霉素的培养基培养大肠杆菌,未导入质粒的细菌将会死亡,原因是这些细菌不含有________基因。
(3)能表达LacZ基因的大肠杆菌在含有IPTG和X-gal的培养基上会形成蓝色菌落,易于识别。根据上述原理可以初步判断________(蓝色/白色)菌落中的大肠杆菌为重组菌。
(4)将制备的探针加入角化囊肿切片中,探针将与______形成杂交带,进而判断SHH基因的转录情况。
解析 (1)重组载体中SHH基因表达需要启动子。(2)大肠杆菌细胞用Ca2+处理后就成为感受态细胞;能在添加氨苄青霉素的培养基上生存的细菌含有氨苄青霉素抗性基因,没有氨苄青霉素抗性基因的细菌将会死亡。(3)能表达LacZ基因的大肠杆菌在含有IPTG和X-gal的培养基上会形成蓝色菌落,重组菌中LacZ基因被SHH基因插入后不表达,重组菌在含有IPTG和X-gal的培养基上会形成白色菌落。(4)判断SHH基因的转录情况,也就是判断SHH基因是否转录出mRNA。
答案 (1)需要 (2)感受态 Amp(或氨苄青霉素抗性或抗性) (3)白色 (4)S
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