基因工程简答题.docVIP

1.某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因并提出解决的方案? （6分） 答：(1)导致星号活性因素：a较高的甘油浓度 b酶与底物DNA比例过高（不同酶情况不同，通常为＞100v/micHo.g） c 低盐浓度（25mM） d 高PH值（PH8.0） e 存在有机溶剂（如DMSO .乙醇（9）.乙烯乙二醇.二甲基乙酰胺.二甲基甲酰胺.sulphalane(12)等） f用其他二价离子代替Mg2+(Mn2+.Cu2+.Co2+.Zn2+等) 　　 （2）抑制星号活性的方法：a尽量用较少酶进行完全消化反应，这样可避免过度消化及过度的甘油浓度. B尽量避免有机溶剂（如制备DNA时二乙醇）污染 c 将离子浓度提高到100—150mM（若酶活性不受离子浓度影响） d将反应缓冲液PH值降到7.0 e 二价离子用Mg2+ 3、目的基因与启动子拼接后，重组分子若不表达，应如何分析？（10分） 答：a.目的基因的表达方式，细胞内表达或者分泌细胞外，如果蛋白为分泌性，那么细胞内检测不到表达，或者表达很少 B.分子量大小，分子量大小决定了蛋白半衰期，因而检测需要延长 C.目的基因的抗体特异性不好则很难以检测表达 D.许多表达宿主自身有自己的蛋白酶，会将你的产物降解，也可能因为修饰系统不同，使得产物的活性不高或者没有。 E.如果宿主菌与蛋白来源菌不同也有可能由于密码子使