布氏杆菌L7%2fL12和OMP31基因克隆及其融合蛋白免疫原性研究.pdfVIP

第五部分疾病防治篇 JR教授馈赠。 究所预防兽医研究室苗利光博士构建并保存；载体pME290由澳大利亚悉尼大学Egerton 布病标准阳性血清、布氏杆菌病虎红平板凝集试验抗原购自中国兽医药品监察所。 公司； Go—Taq 规试剂均为进口或国产分析纯。 1．1．3试验动物：家兔(布氏杆菌抗体阴性)。 1．2方法 1．2．1 DNA模板的制备：用细菌基因组提取试剂盒提取布氏杆菌DNA。 1．2．2PCR扩增：分别设计四对引物(表1)，每一对引物都带有相应的限制性内切酶酶切位点。PCR 扩增在以下条件下进行：94。C预变性5分钟；然后按94。C30秒，58℃30秒，72C1分钟，30个 循环；最后72。C延伸10分钟。PCR结束后，产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定。 表1 PCR扩增引物 引物 序 列 L7／L12P (含HindlII位点)扩增337bp L7，L12D I位点) 5-