鹅鱼皮胶原蛋白和硫酸皮肤素的同时提取及结构、活性的研究.pdfVIP

甥嬲 鹅鱼皮胶原蛋白与硫酸皮肤素的 同时提取及其结构、活性研究 摘要 本文旨在建立从鹅鱼皮中同时提取、分离得到胶原蛋白和硫酸皮 sulfate，DS)的方法，并对其结构和活性进行研究， 肤素(Dermatan 为提取工艺的利用与胶原蛋白和DS的功能开发提供理论依据。主要 研究内容如下： 1．建立了以鹅鱼皮为原材料，从中同时提取分离得到胶原蛋白 和DS的方法。通过正交实验建立了最佳提取工艺，最佳工艺为：木 在此条件下胶原蛋白提取率为59．4％，DS的提取量最高可达52．9 mg／1009。 2．对所提取鹅鱼皮胶原蛋白的理化性质进行研究。SDS．PAGE电 1、Q 泳分析表明胶原蛋白是由Q 2、13三条肽链组成，为I型胶原蛋 白。氨基酸分析中，组氨酸含量最高，达22．53％，亚氨基酸含量占 氨基酸总量的12．06％，不含色氨酸，该氨基酸组成符合I型胶原蛋 白的氨基酸组成结构。在紫外光谱下，胶原蛋白的最大吸收峰为 227nm；红外分析显示，胶原蛋白的三螺旋结构保存完整。最后对胶 原蛋白的热变温度进行测定，结果表明热变温度为22．3℃。 3．在对鹅鱼DS的结构研究中，经化学分析，DS氨基己糖含量为 31．2％，葡萄糖醛酸含量为30．46％，水分含量和N含量分别为7．63％ T 万方数据 和2．35％。DS的凝胶电泳结果显示其分子量在15．22kDa，证明所提取 的DS纯度较高，不含其他糖胺聚糖。在DS-糖分析中表明，DS具有 Di．0S 4种不同种类的二糖，且每种二糖所占总量的比例分别为A 从而得出鹅鱼DS主要是由DS．4和DS．6混合组成。在寡糖片段分析中， 得出部分寡糖片段的结构为： dp2-IdoASl一Ga小队cSl； 1一GalNAcS1一IdoAS dp4：dldoAS 1-GalNA； 1-GalNAcS1-IdoAS1-GalNAcS1．IdoA-GalNAcS dp6：dldoAS 1； 1一GalNAcS1-IdoAS1一GalNAcS1一IdoA- dp8：dldoAS GalNAcS1．IdoA．Ga№～cS1： 1 dp0：dIdoA·GalNAc一(IdoA—GalNAc)4。 在最后进行的核磁分析中进一步确定了本研究所提取的糖胺聚糖为 DS，同时证明鹅鱼DS的种类主要为DS．4和DS．6。 4．在鹅鱼皮胶原蛋白的体外活性研究中，胶原蛋白表现出了良 好的吸湿性和保湿性，可作为化妆品的原材料。此外，在对胶原蛋白 溶解性和凝胶性的研究中表明其溶解度在pH为4．5时达到最大值 13．6％，在pH为6时达到最小值7．2％；胶原蛋白的凝胶能力分别在pH --7时和NaCl浓度为250mmol／L时达到最大。 5．体外抗凝血试验表明，鹅鱼DS具有较好的抗凝血活性，其凝 血机制主要是内源性凝血途径。体外破骨细胞抑制试验表明，鹅鱼 DS能明显的抑制破骨细胞的生长，抑制率达到了57％，具有潜在的