人醇脱氢酶（ADH）相关等位基因的克隆和序列分析.pdfVIP

人醇脱氨酶(ADII)相关等位基因的克隆与序列分析 摘要 目的：克隆人I型醇脱氢酶(ADH)等位基因的编码区序列，为构建 I型ADtt单个等位基因的真核表达系统做准备。利用生物信息学技术区分 I型ADtl基因的不同等位基因并分析其单核苷酸多态性。方法：根据从 5软件在编码区两侧设计一对引物，其中上游引物中有一起始密码子并在5 ’端加上一个Xba I限制性酶切位点，下游引物中有一终止密码子并在5 ’端加上一个EcoRI限制性酶切位点，使扩增产物包含完整编码区序列。 取人癌旁正常肝组织，用TRIzol试剂盒提取总RNA后，利用两步法 RT AB／／等位基因编码区序列。再用双酶切得到目的基因并定向克隆到pUCl9 载体上。经过蓝白筛选后，用限制性酶谱和DNA测序以及BLAST比对分 析进行鉴定，另外还用SNPBLAST比对分析和查询dbSNP数据库分析克 隆到的I型ADH等位基因的单核苷酸多态性。结果：①用RT—PCR方法 扩增出与预期大小相符的ABH基因片段：②经蓝白筛选获得了带 pUCl9-ADH重组质粒的白色菌落；③用限制性酶谱分析表明所克隆片段与 预期的ADH基因编码区大小相符；@DNA测序后的克隆序列编码区与