褪黑素通过调节胶质瘤细胞中microRNA155的表达发挥抑癌作用的机制的研究.pdf

褪黑素通过调节胶质瘤细胞中 microRNA-155 的表达发挥抑癌作用的机制研究 中文摘要 褪黑素通过调节胶质瘤细胞中 microRNA-155 的表达发 挥抑癌作用的机制研究 中文摘要 【目的】 检测经褪黑素处理后的胶质瘤细胞株中 microRNA-155(miR-155) 的表达情况，探 讨褪黑素对胶质瘤细胞增殖、转移和侵袭能力的影响，并探究其抑癌的相关机制。 【方法】 第一部分：1、选用人脑胶质瘤细胞株 U87 、U373 、U251 共三株，分别用不同 浓度（100μM 、1μM 、1nM）的褪黑素处理。运用qRT-PCR 技术检测三株胶质瘤细胞 中miR-155 的表达量相对于对照组的变化。明确褪黑素和miR-155 表达量的相关性， 并确定引起 miR-155 表达量变化最大的褪黑素浓度。2 、选定一株胶质瘤细胞株，并 选用引起 miR-155 表达量变化最大的浓度范围的褪黑素处理细胞。通过 CCK-8 方法 观察胶质瘤细胞的增殖情况。3、通过流式细胞仪技术检测胶质瘤细胞增殖、细胞周 期及凋亡的变化。4 、利用 Transwell 试验检测褪黑素对肿瘤细胞迁移、侵袭的影响。 第二部分：1、选定一株胶质瘤细胞，并选取引起 miR-155 表达量变化最大的浓 度范围的褪黑素处理细胞。分别应用 Western blot 和 qRT-PCR 技术检测细胞中 MYB 基因的 mRNA 及蛋白表达相对于对照组的变化，明确褪黑素与 MYB 基因的相关性。 2 、选同一株胶质瘤细胞，将 MYB 基因干扰后用 qRT-PCR 技术检测细胞中 miR-155 的表达量相对于对照组的变化，明确MYB 和 miR-155 的相关性。 【结果】 第一部分：1、三株胶质瘤细胞U87 、U373 、U251 经过不同浓度（100μM 、1μM 、 1nM）褪黑素处理后，miR-155 的表达相对于正常对照组均明显下降(P0.05)，其中 用 1μM 浓度褪黑素处理的细胞株中 miR-155 表达下降最明显(P0.01) 。2、经过 1μM 浓度褪黑素处理的 U87 胶质瘤细胞增殖较对照组明显下降。3、经过 1μM 浓度褪黑 素处理的 U87 胶质瘤细胞凋亡较对照组增高，而细胞周期没有变化。4 、经过 1μM 浓 度的褪黑素处理的 U87 胶质瘤细胞迁移和侵袭能力较对照组明显下降。 I 中文摘要 褪黑素通过调节胶质瘤细胞中 microRNA-155 的表达发挥抑癌作用的机制研究 第二部分：1、经过 1μM 浓度褪黑素处理的U87 胶质瘤细胞中 MYB 基因的mRNA 和蛋白表达量均明显低于对照组。2 、在 U87 胶质瘤细胞中干扰 MYB 基因后，miR-155 的表达量下降。 【结论】 本研究结果表明褪黑素通过下调 MYB 基因从而抑制 miR-155 表达，1μM 浓度褪 黑素可以增加肿瘤细胞的凋亡使胶质瘤细胞增殖降低，并且能抑制胶质瘤细胞的迁移 和侵袭能力，进而发挥抑癌作用。本实验阐明了褪黑素在脑胶质瘤中抑癌作用的 microRNA 表观调控机制，为揭示褪黑素的抗脑胶质瘤作用机制奠定了理论基础，为 发现脑胶质瘤的临床治疗靶点提供新思路。 【关键词】 胶质瘤；褪黑素；miR-155 ；MYB ；抑癌机制 作 者：顾俊怡 指导老师：李向东 II Melatonin exerts an anticancer effect by modulating microRNA-155 in glioma cells Abstract Melatonin exerts an anticancer effect by modulating