三种油气指示菌定量PCR方法的建立及其在油气田土壤中的初步应用-论文.pdfVIP

生物技术通报 · 研 究报 告 · BloTECHNoLoGY BULLETIN 2013年第4期 三种油气指示菌定量PCR方法的建立及其在油气田 土壤中的初步应用 邵明瑞 许科伟 汤玉平2 赵克斌 符波 刘和 (1．江南大学环境与土木工程学院 环境生物技术研究室，无锡 214122；2．中国石化石油勘探开发研究院 无锡石油地质研究所，无锡 214151) 摘 要 ： 利用建立的pmoA、bmoX和alkB基 因的定量PCR方法分别研究了油田和气田土壤 中甲烷氧化菌、丁烷氧化茵和 中链烷烃氧化茵的数量丰度，并以背景区土壤作为对照。pmoA和alkB的基 因数量均随着采样深度的增加而降低 了1—2个数量级。 手工法提取油气田土壤 DNA进行油气指示菌基因定量的结果显示，油田区和气田区土壤 中pmoA和alkB基 因丰度略高于背景区样 品。气田区样品的bmoX基 因丰度为2．75×10拷贝数 ／g，高于背景区和油田区土壤样品0．5一1个数量级。试剂盒提取的土壤DNA 的基因定量结果表明，油田区样品pmoA和alkB基因丰度分别为3．09Xlo4和 2．56×1o6拷贝数，g，高于气田区和背景区土壤样品， 且气田区样品bmoX基因丰度分别高于背景区和油田区样品 1个数量级和0．5个数量级。结果表明3种油气指示菌的定量PCR技 术的建立可为油气微生物勘探提供新的检测手段 。 关键词 ： 油气微生物勘探 实时荧光定量PCR 甲烷氧化菌 烃氧化茵 TheQuantitativePCRTechnologyforThreeOilandGas IndicatingBacteriaandItsPreliminaryApplication inOilandGasFieldSoils ShaoMingrui XuKewei TangYuping ZhaoKebin FuBo LiuHe (1．LaboratoryofEnvironmentalBiotechnology，SchoolofEnvironmentalandCivilEngineering，JiangnanUniversity，Wuxi214122； 2．WuxiResearchInstituteofPetroleumGeology，ExplorationandProductionResearchInstitute， SINOPEC，Wuxi214151) Abstract： Inthispaper，themethane-，butane—andalkane-oxidizingbacteriacontentsinoilandgasfieldsoilwasdeterminedbythe establishedreal—timequantitativePCR (qPCR)technologiestargetingthepmoA，bmoXandalkBgenerespectively，andthebackgroundfield soilswerecomparedasthecontro1．ThepmoAandalkBgenecopiesdecreasedby1-2ordersofmagnitudewiththesamplingdepthincreased． ThegenequantificationresultsofDNA samplesextractedbymanualmethodindicatedthepmoAandalkBgenecopiesinoilandgasfieldsoils wereslightlyhigherthaninbackgroundfieldsoils．ThebmoX genecopiesingasfieldsoilswas2．75X10’copies／g．whichwas0．5—1orderof magnitudehihge