抗菌肽CAP18的规模化表达及表达产物的活性检测.pdfVIP

摘 要 摘 要 抗菌肽是宿主防御系统抵御外源细菌感染的一个有力武器，它们能通过直接攻击微生物 的膜表面而抑制微生物的生长，是一种最具潜力的抗生素替代品。本研究的目的是通过基因 优化技术，采用SOE法合成c-CAP18 基因，完成抗菌肽在复合自动诱导培养基中的大规模发 酵培养，并检测表达产物的体内外抑菌和抗病毒活性，为规模化生产和最终临床应用提供理 论依据。 根据CAP18 活性片段氨基酸序列，按照大肠杆菌密码子偏嗜性，采用SOE 技术，设计 合成了 CAP106-142 的编码基因，命名为c-CAP18 ，将其定向克隆至原核表达载体pET-32a 的 多克隆位点，获得含有1~8 个片段的串联多聚体表达载体，命名为p-c-CAP18 Ⅰ-Ⅷ，完成了 p-c-CAP18 Ⅰ-Ⅷ重组质粒在大肠杆菌BL21 (DE3) 中的表达。试验结果表明，在30℃、OD600 菌密度1.0、IPTG 浓度0.8 mmol/L、诱导时间为8 h 的条件下，含有双拷贝的p-c-CAP18 Ⅱ 重组质粒能获得高水平的表达，融合蛋白表达量达到0.788 g/L 。 为了选择适合于放大培养的培