MMP-7基因的克隆表达及在癌症检测中的价值评估.pdf

摘要 摘 要 背景：近年来国内外的多项研究报道人基质金属蛋白酶-7 （Matrix metalloproteinase-7 ， MMP-7 ）在多种类型癌症及肿瘤细胞系中存在过表达现象，而在相应的正常组织中却不 表达或低表达，这预示其较高的诊断价值。在血清学中也有部分报道，但对癌症患者血 清中自身抗体的检测还未见报道。我们检测了食管癌，胃癌，乳腺癌，肺癌血清中MMP-7 自身抗体的存在情况，以初步评估其诊断价值。并利用原核表达系统表达该蛋白，制备 该蛋白的多克隆抗体，为后续研究打下基础。 方法：提取食管癌组织中总RNA ，根据 GeneBank 公开发表的 MMP-7 cDNA 序列设计 引物，用 PCR 方法扩增开放阅读框架内 492bp 的DNA 片段，并将该片段定向插入到原 核表达载体 pET-17b 和 pET-28b 中，获得了两种重组表达质粒。将PCR 、酶切鉴定及测 序鉴定正确的重组质粒，转化入大肠杆菌 E.coli Rosseta (DE3) 中，经IPTG 诱导蛋白表 达，SDS检测所表达的蛋白，对重组蛋白的表达条件进行优化，并对表达重组