绵羊羊膜上皮细胞的分化潜能及其在骨缺损模型治疗中的应用.pdf

摘 要 羊膜上皮细胞（amnion epithelial cells，AECs）是由废弃的胎盘羊膜衍生的 具有干细胞特性的细胞。AECs 不仅具有多向分化潜能，而且许多研究都证实其具有 免疫豁免性，移植后不产生免疫排斥反应，因缺乏末端转移酶端粒，移植后不致瘤， 再加上来源广、易获得，不存在伦理争议等，而成为细胞研究工作者的研究热点之一。 应用 AECs 进行一些疑难症的治疗是临床研究工作者的最终目标。临床应用治疗顺利 进行的前提是以安全可靠的动物实验为基础。目前，AECs 的研究主要以人的为主， 在临床治疗研究中以人 AECs 治疗肝病、肺病、心脏病、糖尿病、神经系统疾病等疑 难病症。而绵羊 AECs 的研究在国内尚未见报道，国外的相关研究也极少。因此，本 研究对绵羊 AECs 的分离培养、干细胞特性的鉴定、体内分化及体外定向诱导分化进 行了系统的研究。 1.绵羊羊膜上皮细胞的分离与培养 实验参照人羊膜消化分离获得原代细胞的方法，对绵羊羊膜的消化分离方法进行 了探索，最终选用胰酶替代物 TrypLE 消化绵羊羊膜分离获得原代细胞，获得的原代 细胞活力高，纯度好。细胞培养过程中选用了 15%的胎牛血清浓度的培养液进行细胞 的培养，很好地维持细胞良好的生长态势。 在不同密度梯度培养情况下，通过观察比较，确定了细胞接种的最