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多聚半乳糖醛酸酶反义基因在加工番茄中的遗传转化 摘 要 加工番茄是新疆一大优势特色产业和出口创汇的拳头产品，选育适合产业需求的加 工番茄品种一直是育种工作的目标。近年来随着基因工程技术的发展，科学研究愈来愈 倾向于通过基因工程的手段改进加工番茄品种性状，培育耐贮运、高品质的加工番茄新 种质，对加工番茄在储存与运输中的腐烂变质问题的解决有重要价值。本研究以加工番 茄品种B40子叶盘和下胚轴切段为外植体，研究了不同种类和浓度的细胞分裂素z(T、 吞BA和K刀和生长素(认A、BIA和NAA)组合及附加物AgNO3对外植体诱芽的影响; 同时本研究利用农杆菌EHA015介导转化，对影响外植体转化的因素(预培养时间、侵 染时间、农杆菌浓度、共培养时间)进行了深入探讨，将多聚半乳糖醛酸酶口G)反义基因 转入加工番茄品种B40，并获得了加工番茄品种B40 的转基因植株。主要试验结果如下: 1.在一定的浓度范围内，在MS基本培养基中添加不同浓度的细胞分裂素和生长素 构成不同的诱芽培养基。在研究三种细胞分裂素对子叶和下胚轴愈伤组织及不定芽分化 的诱导中，Tz 明显优于 ‘BA，KT最差，确定最佳的诱芽培养基为Ms十2.0m留lTz 十0.2Om留1】AA，出芽率为836.%;在三种生长素对子叶和下胚轴愈伤组织及不定芽 分化的诱导中，IAA与-6BA组合对芽的诱导效果比mA、NAA好，出芽早，出芽也多， NAA组合不利于加工番茄品种 B40 芽的诱导;子叶外植体的出芽率明显高于下胚轴外 植体，因此，本研究将子叶外植体确定为加工番茄品种B40遗传转化体系的受体:再生 芽在Ms一lm留11AA生根培养基上能正常生根，并发育成完整的小植株. 2.在再生培养基中添加一定浓度的AgN伪对加工番茄品种B40不定芽的发生率无显 著促进作用。 3.通过子叶外植体的卡那霉素敏感性筛选试验，确定加工番茄B40卡那霉素的最 佳筛选浓度为30mLgl ;并对抗生素狡节青霉素(Crab)对农杆菌的抑制效果进行了试验， 本研究使用的C别七质量浓度为300mgl，此浓度足以抑制农杆菌的繁殖。 4.建立了加工番茄品种B40子叶外植体的高频遗传转化体系，确定了预培养时间、 侵染时间和侵染浓度、共培养时间等转化条件。其最佳预培养时间为Zd;当农杆菌的菌 液浓度为OD朗=0.6、侵染时间为01nlln时转化率最高;其最佳的共培养时间为Zd。通 过农杆菌介导法将PG 反义基因导入加工番茄品种B40，并且获得了PG抗性植株。 5.对获得的41株抗卡那霉素转基因植株进行PCR检测，结果表明:其中9株为阳性 植株，其转化率为22%，初步证实了部分加工番茄B40植株中己导入PG反义基因。 关键词:加工番茄:离体再生:多聚半乳糖醛酸酶(PG):反义基因:遗传转化 GENETICTRANSFORMATIONOFANTISENSE P0LYGALACTUR0NASEGENEF0RPR0CESSING TOMATO ABSTRACT TbeProcessnigtoma1OesPr0ductinowas 此 ~ InductlnoniXinjinagProvince. Ch即5吨 奴bets明duslatblePr侧笼ssngi tomatorofPDrductionwas hteat花etrofbr以刃ing workers.Wihthte devel叩mentof趾 techaiq娜ofGneetlcengneenng，声。vel morenad mOre勺℃ndedotw出月slmPmving此 比肚a以“5，br以月ngi newv硕etiesrof otsringnad 腼 sportingeasly3lnadbr以刃Inghte hihgerq期lytirofProO巴妈mgtomato，ni面5叭旧y，hte problmesofrotdunng奴 咖山gnadrt即sportingw曰限weUreoslved.Coytledonsnad byl心阳ytlsofBO4P找e‘ss吨加mal助研吧此uesdasexpl即tsot劝川ydlfferentocmblnations ofc刃okininz(T，6一BAroK劝俪也auxm(M涟，BIAroNAA)如dslirve 苗rt时enobud induct