大白菜温度敏感细胞质雄性不育系同工酶分析.pdfVIP

大白菜温度敏感细胞质雄性不育系同工酶分析 摘 要 本实验通过对大白菜细胞质雄性不育系CMS3411-7}CMS7311及其保持系 的同工酶进行了比较研究分析，为探究其温敏型雄性不育和育性转化的内在机理 提供必要的线索。 论文分别对两套不育系及相应的保持系 6叶苗期叶片和根、花期花蕾的 POD(过氧化物)同工酶、EST(M酶)同工酶、ATPase腺昔三磷酸酶)同工酶、 AMY(淀粉酶)同工酶进行了垂直不连续聚丙烯酞胺凝胶电泳分析。对经9℃左右 低温诱导、30001ux光照条件下生长的CMS7311育性转化(不育变可育)及回复 (育性又由可育转变成处理前的不育态)整个过程进行了连续取样及花器育性观 察 ，追踪p-EST同工酶随雄蕊育性转化的动态变化过程。并进一步对与雄蕊育 性密切相关的特异酶带进行了回收、测序。取得了以下主要结果; 1通过对不育系CMS3411-7,CMS7311及其保持系不同器官多种同工酶的 比较研究，认为花蕾的醋酶同工酶与大白菜雄蕊的育性表达及转化有密切关系。 2初步发现大白菜小花蕾中Rf为0.718,0.742的p-EST同工酶酶带的消失 与CMS7311和CMS3411-7雄性不育性关系密切。 3首次发现小花蕾(小于1.5mm)中Rf为。.759的p-EST同工酶酶带的出 现与温度敏感不育系的育性转化关系十分密切。 4通过SDS分析发现，Rf为。.718,0.742和0.759的EST同工酶分子量均 为14KD的蛋白质，初步判断它们可能有相似的核心亚基结构。 5建立了适合大白菜同工酶回收的简便方法，用电洗脱法对凝胶中的醋酶进 行回收时，凝胶不能预先染色。应于电泳完毕后切取胶两边各。.5cm的胶条进行 染色，染色完毕将染色胶条放回原来位置，以指示目的条带的位置，然后切取目 的条带，进行电洗脱回收。 关键词:大白菜，温度敏感，细胞质雄性不育，同工酶，育性转化 ISOENZYMESANALYSESEofCYTOPLASMMALE STERILELINESENS!TIVEDtoTEMPERATUREin CH!NESECABBAGE ABSTRACT ThemalesterilelineofChinesecabbagewithBrassicanapuscytoplasm CMS3411-7,CMS7311andtheirmaintainerswereusedinthisexperiment,andthe isozymesrelatedwithsterilitychangeoverwereanalyzedinordertoprovidethe necessarycluesofthemechanismsoftemperaturesensitivemalesterilityand changeoverofsterility. ThePOD,ATP,AMY,ESTisozymesofleavesandrootsinseedlingstage withsixleavesandthatofbudsinfloweringstagewereanalyzedinthemalesterile linesandtheirmaintainersbyusingverticalslabpolyacrylamidegelelectrophoresis. ResearchonthesterilelineCMS7311dealtwithabout90Cand30001uxlightinthe wholepress(fromthesterileappearancechangesintofertileappearanceandthe fertileappearancechangesintothesterileappearance),intheperiod,thestamen sterilitywasobservedandp-ESTwasanalyzedcontinuously,inordertofindoutthe changeofP-ESTaccompaniedbythesterilitychangeover.Additionally,theaimed zymogramsbandswereelectrica