《笼养海兰褐蛋雏鸡肠道菌群的聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳分析-论文》.pdfVIP

动物营养学报 2014，26(2)：504—512 ChineseJournalofAnimalNutrition doi：10．3969／j．issn．1006-267x．2014．02．028 笼养海兰褐蛋雏鸡肠道菌群的聚合酶链式 反应 一变性梯度凝胶 电泳分析 王秋菊 崔一 刘胜军 尹汉周 (黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319) 摘 要：本试验 旨在采用聚合酶链式反应(PCR)一变性梯度凝胶电泳(DGGE)法分析笼养海 兰褐蛋雏鸡肠道菌群。随机取5只8周龄笼养鸡剖杀，取全部小肠，将5只鸡的十二指肠、空肠、 回肠和盲肠 内容物分别混匀，提取基因组DNA，以细菌通用引物扩增 16SrDNA高变区序列，对 PCR产物进行 DGGE分析。结果表明：雏鸡不同肠段 中细菌茵群组成差别很大，十二指肠、空 肠、回肠和盲肠分别分离出8、l2、8和9株菌，共20个菌株，其中有乳酸菌属 7株，包括2株鸟乳 酸菌(Lactobacillusaviaries)、2株棉籽糖乳球 菌 (Lactococcusraffinolactis)、1株敏捷乳杆菌 (Lactobacillusagilis)、l株陪伴粪球 菌(Coprococcuscomes)和 1株 同代乳杆菌 (Lactobacillus equigenerosi)；且各肠段有共同菌3株 ，为鲁梅利杆菌(Rummeliibacillusstabekisii)、Lactobacillus equigrenerosi和阴道加德菌(Gardnerellavaginalis)。结果提示，同龄笼养海兰褐蛋雏鸡肠道细菌 茵群结构与肠道的不同部位有关，各肠段中细菌茵群的组成差异很大。 关键词：雏鸡；笼养；16SrDNA；PCR—DGGE；茵群 中图分类号：$852．6 文献标识码 ：A 文章编号：1006—267X(2014)02．0504~9 家禽肠道是一个复杂而多样 的生态环境 ，其 与肠道功能的研究。因此，本试验采用特定细菌 中有微生物超过 400种，这些微生物对宿主的正 物种通用引物对笼养的海兰褐蛋雏鸡所有肠段内 常发育和营养物质的消化吸收起着重要 的作用。 容物菌群 16SrDNA高变区进行聚合酶链式反应 长期以来 ，由于细菌形态过于简单 ，缺乏明显的外 (PCR)-DGGE指纹图谱 比较分析 ，研究笼养雏鸡 部特征，人们对环境中细菌菌群结构的了解不多。 十二指肠 、空肠、回肠和盲肠中内容物菌群结构和 随着基于 16SrDNA分子技术发展，更全面更深入 多样性的变化，旨在为研制新型微生态制剂提供 地了解菌群结构成为可能，其 中变性梯度凝胶电 理论依据 。 泳(DGGE)和温度梯度凝胶 电泳 (TGGE)技术被 用于检测人类 J、猪 j、鸡 等的胃肠道菌群结构 1 材料与方法 和多样性 4j。肠道菌群失调会减弱机体对营养物 1．1 试验动物与样 品采集 质的吸收率，降低机体免疫力，削弱肠道的屏障功 试验动物于2013年5月选 自大庆兴和牧业蛋 能 ，影响畜禽的生长和健康，对肠道菌群失调是 鸡养殖场 ，全封闭式饲养 ，海兰褐蛋雏鸡采用 3层 否会导致动物肠道功能紊乱等的相关研究的需求 笼养，舍温25℃，自由采食，自由饮水，采用人工 十分迫切。目前 ，对宿主与肠道菌群之间相互作 光照，每 日光照 ll～12h，按海兰褐蛋雏鸡常规程 用的了解非常有限，直接限制了对动物肠道菌群 序进行免疫 。基础饲粮组成及营养水平见表 1。 收稿 日期：2013—09—03 基金项 目：黑龙江省教育厅面上资助项 目；黑龙江省教育厅创新团队项 目(2010td05)；黑龙江八一农垦大学校科研启动项 目 (2012-B-05) 作者简介：王秋菊 (1979一)，女 ，黑龙江海林人，博士，讲师，主要从事动物肠道营养调控研究。E．mail：