PEG化血红蛋白的分离纯化.pdfVIP

大连理工大学硕士论文 摘要 摘要 本文将溶胀渗透与离子交换层析结合，从红细胞中提取了无脂的血红 蛋白，并对PEG修饰后的血红蛋白(PEG．Hb)采用离子交换层析辅以超滤 的方法进行分级分离，然后对修饰前后的血红蛋白的性质进行了比较。 ／对红细胞溶胀的影响因素进行了研究，证实了清洗红细胞的必要性并 获得最佳清洗条件，讨论了渗透溶胀方法中渗透压对红细胞释放血红蛋 白的影响；考察了在去除红细胞膜壳过程中离心和膜过滤联合操作的转 速、离心时间的影响；获得了离子交换层析除杂蛋白和脂类物质的最佳 实验条件，并将上述步骤进行了合理的集成。由以上方法制得的血红蛋 白经高效液相检测不含磷脂，经凝胶过滤检测显示了单峰。 Fast Flow上的条 进行血红蛋白在阳离子交换层析介质Sp．Sepharose 件探索，得到了最佳吸附条件(在此条件下，血红蛋白的吸附率为99．5％)。 利用所得条件，进一步探索了PEG修饰后的血红蛋白在阳离予交换层析 上的吸附，得到纯化PEG．Hb的最佳吸附条件。经凝胶过滤检测，纯化 后的PEG—Hb样品不含未修饰的血红蛋白，修饰度小的PEG—Hb含量降 低。而经毛细管电泳检测，纯化后的PEG．Hb样品含少量未修饰血红蛋 白，经进一步实验表明在所用毛细管电泳的条件pH2．5的情况下PEG—Hb 中的PEG链发生部分解离，未修饰血红蛋白的出现是由于PEG从PEG— Hb上解离下来的结果。卜，、、 考察了修饰前后的血红蛋白在阴、阳离子交换层析、凝胶过滤及毛细 管电泳上的变化，证实了PEG修饰后血红蛋白的多组分特性，发现修饰 后的血红蛋白在阴离子交换层析中PEG链的屏蔽起主要作用。修饰前后 的血红蛋白用pH2．5的缓冲液处理后，比较它们在毛细管电泳及凝胶过 滤的行为，发现修饰后的血红蛋白的稳定性明显增加。测定了修饰后的 血红蛋白的氧和曲线，测得P50值为11．9mmHg，有运输氧气的能力。 关键词：血红蛋I刍(HbY,PEG修饰的血红蛋白(PEG—Hb)、离子交换层析、 毛细管电泳?凝胶过以细胞破碎v 大连理工大学硕士论文 Abstraet Abstract frombovineredbloodcells hemoglobin(Hb)wasprepared by Lipid—free a solutionand withanion withhypotonic purification ion lysis exchange ofthe Hbwith chromatography．Afterconjugationpurified polyethylene ion conjugatedproduct(PEG—Hb)waspurifiedby glycol(PEG)，the exchange and ion ultrafiltration．Theon chromatography changeschromatography，gel filtration，highperformance