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（四）体外培养细胞生存所需基本物质 六碳糖是主要的能源（葡萄糖、半乳糖） 1. 糖 2. 氨基酸 所有的细胞都需要谷氨酰胺，其所含的氨是核酸中嘌呤和嘧啶的来源；其它还有精氨酸、胱氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、组氨酸、酪氨酸等 培养细胞也需要维生素，如生物素、叶酸、泛酸、核黄素、硫胺素、胭酰胺等 3. 促生长因子 EGF, FGF, NGF, PDGF, EDGF等 激素：胰岛素——促进细胞利用葡萄 糖和氨基酸 氢考——促进上皮细胞生长 4. 其它物质 基本元素：钾、钠、钙、镁、氮和磷 微量元素：铁、锌、硒等 （五）渗透压 人血浆渗透压约290mOsm/kg，可视为培养细胞的理想渗透压 鼠细胞渗透压约320mOsm/kg 大多数培养细胞的渗透压在260 mOsm/kg - 320 mOsm/kg （六）培养基 按物质状态：半固体培养基，液体培养基 按其来源： （1）合成培养基：根据已知细胞所需物质 的种类和数量严格配制而 （2）天然培养基：成分尚未搞清楚，如血清、 血浆等 （3）无血清培养基：基本培养基＋促生长物质 （七）附着底物 除少数悬浮型细胞外，绝大多数培养细胞需要合适的底物以附着其上 类型：（1）玻璃：透明、易观察、易洗涤、能反复使用； 缺点：易破碎（2）一次性塑料：常用聚苯乙烯，聚四氟乙烯； 缺点：易产生划痕，不宜反复使用 （3）微载体：由聚苯乙烯和聚丙烯酰胺制成的小球 体，附着面大，利于大量繁殖细胞 （4）饲细胞（Feeder Cells）：也称滋养细胞，如 用成纤维细胞长成单层后，大剂量射 线照射，细胞失去增殖能力但尚存活 并有代谢活动；再将其它细胞接种于 其上。饲细胞的代谢产物利于其它细 胞生长 （八）抑制细胞生长因素 制备培养基消毒不彻底：有毒物质或微生物混入细胞生存环境中 血清灭活：能除去培养基中的补体和降低免疫球蛋白的毒性，并不损伤多肽生长因子，但可能灭活另一些有用的成分 六、细胞培养的设施与基本条件 实验用品： 超净工作台，压力蒸汽消毒器，电热干燥箱，滤器，酸缸 CO2培养箱 倒置显微镜 酶标仪、微孔板震荡器 液氮罐 自动双重纯水蒸馏器，纯水仪 耗 材：培养瓶，吸管，电动吸引器，培养板，冻存管 压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广 电热干燥箱：干热消毒（160 ℃ ，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒 滤 器：过滤除菌，大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌 超净工作台：为细胞操作提供无菌环境 紫外灯：紫外线消毒。主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒 超净台 超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化 净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。 CO2培养箱 CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％CO2 使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题： ① 用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微 松，以保证通气 ② 保持培养箱内空气干净。定期消毒（90 ℃ ，14 h) ③ 箱内火菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中以 保持箱内湿度，避兔培养液蒸发 纯水仪 七、器械 用于解剖动物、取材和原代培养切割组织等 解剖刀（剪）、镊子、缝针（线）、持针器、止血钳等 八、培养器皿（一）玻璃瓶皿 玻璃瓶：用于配制、储存培养液、血清等 培养瓶：用于培养细胞 培养皿：用于培养和分离细胞 吸管、离心管、烧瓶（杯）、量筒、漏斗、试管、注射器等 （二）塑料瓶皿 多孔培养板：适于做单细胞克隆、生长曲线测定、药物测试和单克隆抗体等研究：分为4、6、24、96孔板 培养皿： 培养瓶：适于在CO2培养箱中使用 九、培养基（液） （一）平衡盐溶液： （二）天然培养基：血清、组织提取液、鸡 血浆等 （三）合成培养基 培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培养基和合成培养基 天然培养基： 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液） 优点：营养成分丰