胚胎第17天小鼠肾单位三维重建和其毗邻关系分析.pdfVIP

耿孕龄17天孕鼠，2．5％戊巴比妥钠50mg／kg腹腔注射麻醉后，剖腹耿出胎 鼠，打开胎鼠腹腔取双侧l肾脏，4％多聚甲醛与1％戊二醛混合固定液浸泡固定24 小时，经肾门，与肾长轴垂直截切肾脏组织块，入同种固定液续固定48h，PBS 冲洗，锇酸后固定，各级乙醇至丙酮脱水，丙酮与环氧树脂EP812混合液浸透， u 单纯树脂EP812包埋。采用超薄切片机配钻石刀连续半薄切片(2．5m厚)，所有 切片进行甲苯胺蓝染色以显示组织形态结构，用于肾单位三维重建。 3、显微图像获取与配准 AX 70显微镜： 应用“计算机．显微镜．数码相机图像采集系统(Olympus DP 50相机，东京，日本)，对E17d的连续切片进行显微镜下拍照。图 Olympus 像大小为2596×1889像素，每个像素相当于1．83岬×1．83lam。图像配准过程在 计算机Windows平台上操作。其原理是，通过比较相邻两幅图像内生理对应点的 像素狄度值的相似性来确定每个图像平移及旋转，使其达到生理空间的一致【雪 4，5】。首先得出相邻两幅图的相对变换值(平移距离和旋转角度)，再通过求相对 变换值的相加函数得出系列图像中的每幅图的绝对变换值，从而实现图像配准。 4、数字追踪与三维分析 对E17d小鼠肾单位肾小管进行数字追踪，追踪是通过C语言设计的程序在 计算机Linux平台上实现的。泌尿小管的追踪始于肾门处的输尿管芽，截止至与 肾单位的连接处。血管的追踪始于肾小体血管极的出球微动脉。追踪过程自动生 成一个数据文件，记录追踪肾小管走行的空间坐标，基于此坐标集，肾小管走行 的毗邻关系分析，以及肾小管长度测量等得以实现。小管长度的测量运用欧几旱 德算法，即累加沿近端小管或出球微动脉走行的每两个连续点的距离，得出沿近 端小管或出球微动脉走行任意两点之间的距离。 杰厄j万可F再丐丽 “2 实验结果 对E17d小鼠连续组织切片的形态学分析显示，E17d小鼠肾脏可清楚的区分为周 同的皮质和中央的髓质。肾脏被膜下的生肾区可见输尿管芽末端分支大泡的各种断 2 面，其周围是密集的基质细胞，并可见由基质细胞形成的囊泡体、逗号小体和S 小体，其内侧可见III期肾小体，而最内侧近髓质的皮质区分布为Ⅳ期肾小体及围 绕其周围的自身近端小管和远端小管，此时，髓放线并不明显，可见输尿管芽穿 过皮质区到达肾被膜下，并形成对称的分支泡。髓质内可见稀疏排列的、梯状的 间充质及与其垂直排列的、成束的输尿管芽，以及走行在其周围的发育中的髓襻， 肾乳头已开始形成。 对E17d小鼠肾单位进行数字追踪表明，输尿管芽在此期已有6级以上的二权 分支，分支的对称性并不贯穿全程。最后以及分支术端形成大泡，每侧连接2个 以上的肾单位，它们中常常有一个逗号小体或S形小体。较成熟的肾单位髓襻深 入髓质，并常常与输尿管芽伴行，同时，近髓质的肾单位的出球微动脉常攀附髓 襻升支粗段走行，而髓襻降支周围常常被发育中的血管丛包绕。 结 论 l、输尿管芽在E17d已有6级以上的二权分支，分支的对称性并不贯穿全程。 最后一级分支末端形成大泡，每侧连接2个以上的肾单位，它们中常常有一个逗 号小体或S形小体。 2、近髓质的肾单位的出球微动脉常攀附髓襻升支粗段走行，而髓襻降支周围常常 被发育中的血管丛包绕。 关键词 小鼠；肾发生发育；输尿管芽；微动脉；三维重建 3 ·英文论著摘要· Three-dimensionalreconstructionofthe embryonic ’