新型快速荧光动态图像摄录和处理分析系统及其对活细胞的应用研究.pdf

!堕查兰苎主兰竺堡苎 塑呈 的有关影响，采用了显微静态、动态图像分析技术、相分析电泳激光散射技术、 显微拉曼共焦光谱技术等多种手段，分析FITC-SNA荧光标记情况下所添加不同 浓度戊二醛固定液在不同孵育时间对轻、老龄红细胞整体形态结构、细胞膜、细 胞内分子三个层次水平上的多个结构与功能参数的影响；最后选用对红细胞影响 较小的戊二醛浓度和孵育时间，实现了FITC．SNA荧光标记活态红细胞的微管吮 吸实验，观察了红细胞模拟通过毛细血管情况时表面电荷密度的变化，得到了红 细胞形变大小与细胞表面电荷密度的关系，这种方法为细胞表面电荷的研究提供 了有益的参考。 根据本文的研究，得到以下结论： (1)采用以数码相机图像摄录模块作为成像器件，并结合光电传感技术、数字 信号处理技术、信息存储技术、计算机硬件技术、计算机软件技术，利于 设计出一采用CCD成像芯片基于计算机系统操控、具有较高性价比、较 高空间分辨率和时间分辨率、接口简单的快速荧光动态图像系统。 (2)本文所研制的快速荧光动态图像分析系统除了可提供丰富的通用图像处 理和分析能力外，结合其它技术和系统可以完成更多的测试分析和研究， 如结合荧光探针技术可以测定分子水平的物质的动态变化情况。 (3)按上述思路所研制的系统性价比高、结构紧凑清晰、配置合理、对象模块 的输入输出信息明确，且易于扩展、传输控制接口简捷及使用方便。 (4)FITC-SNA与量子点都可标记红细胞的表面带电状态；用带正电荷量子点 可更好地反映红细胞有关表面电荷密度大小与分布状态。其反映的电荷密 度大小与用Zeta电位仪测定的毖ta电位随其老龄化而变化的情况一致。 (5)FITC．SNA标记是对有关带电分子(唾液酸)的特异性标记，而量子点标 记则是对红细胞表面所有负电荷的标记，但由于它直接作用于细胞表面地 负电基团所以改变了红细胞表面带电状态，从而影响其形态结构和功能。 结合(4)说明二者各有优缺点。 (6)FITC．SNA荧光标记中使用戊二醛会对红细胞膜的变形能力有不同程度 的减弱，减弱程度不仅与戊二醛溶液浓度成正比，而且与孵育作用时间正 相关；对胞内血红蛋白也有不同程度的影响，这种影响的结果类似与红细 胞老化过程。 !壅查兰堡主兰竺笙茎 ： 苎量 (7)FITC-SNA荧光标记中使用的戊二醛对轻龄、老龄红细胞膜的作用效果不 同，戊二醛对轻龄红细胞的作用较弱，尤其是在微浓度下，0．0005％的戊 二醛浓度作用15分钟时红细胞的变形能力受影响变化的幅度仅为约 10％，红细胞状态基本影响不大，且也可实现荧光标记。 (8)采用FITC-SNA荧光标记的红细胞可在外力作用下通过微管而模拟反映 红细胞通过毛细血管的状态，其在吸入与通过过程中的荧光强度变化，可 说明其对应的红细胞表面电荷密度的变化，这会为有关红细胞膜表面现象 的研究提供依据以及有用的技术手段。 (9)本论文研制的快速荧光动态图像分析系统可实现对有关荧光的动态测量 及一定程度的定量分析，效果较好，基本满足要求。 本论文创新点主要在于： I．提出了面向对象的基于数码相机摄录模块，采用CCD成像芯片、并结合光 ．电传感技术、数字信号处理技术、信息存储技术，计算机硬件技术、计算机 软件技术，基于计算机系统操控的系统设计思路；且基于这种思路研制了快 速动态荧光图像分析系统： ，2．．首次提出并实现了存储模块双端口化的操作，即不同系统可以自动地分时对 存储模块进行读、写操作： 3．提出了利用移相技术提高帧率的技术，并成功地利用对象模块实现了动态短 片时间分辨率的提高； 4．首次进行了对红细胞表面带电状态(包括电荷密度与分布)的荧光标记及成 像与分析测定。 5．探索出对红细胞表面电荷以FITC-SNA及量子点进行荧光标记的有关技术与 方法。 6．系统研究了FITC-SNA荧光标记中不同浓度、不同孵育时间的戊二醛对轻、 老龄红细胞的形态、膜表面电荷、膜力学