柔嫩艾美耳球虫抗原基因TA4与EtMIC-%2c4-的克隆和原核表达载体的构建.pdf

摘 要 TA4基因是柔嫩艾美耳球虫(E tenella)孢子化卵囊的一个表面抗原基因，其表达的蛋白 具有一定的免疫原性；EtMIC4是编码E tenella细胞器微线蛋白的基因，在子孢子及裂殖子阶 段表达，分泌的蛋白向后覆盖于虫体的表面，与宿主细胞表面相黏附，参与虫体的运动及入 侵。本文以1A4基因和与球虫入侵宿主细胞有关的EtMIc4部分基因作为研究目标，根据 Genbank中登录的序列设计引物，利用RT-PCR技术从E tenella(上海株)孢子化卵囊中扩增 得到的转化子经PCR鉴定和酶切分析筛选阳性克隆：将大小与EtMIC4基因片段预计分子量一 致的片段纯化并经DRI和HindHI双酶切回收后，与经EcoRI和HindⅡI双酶切回收的 (pGEM．TA4)，经核苷酸测序．该序列全长773bp，其中TA4基因的阅读框为651bp，编码 b口、51 为99％(765／770)，即在1M(浙江