二十六株灵芝菌丝体抑瘤三萜研究.pdf

二十六株灵芝菌丝体抑瘤三砧的研究 摘要 本课题对灵芝属5个种(赤芝G.lucidum，松杉灵芝Gtsugae,Goerstedii,G. subamboinense，无柄灵芝G.resinaceum)共26个菌株的液体发酵菌丝体三菇进行了 研究口 首先分析了用香草醛一高氯酸比色方法定量测定灵芝总三菇的最优条件，确定 为样品甲醇溶液在70℃水浴挥干后，与O.1mL5%香草醛一冰醋酸，ImL高氯酸在 60℃水浴条件下反应15分钟，用3.9mL的冰醋酸终止反应，547nm处进行光吸收 值的测定。 其次，用MTT法对乙醇提取的粗三iPS(GLF)及其总三tox酸成分(GLT)和非酸性 成分(GLX)的体外抑瘤效果进行检测分析。结果显示GLF对人急性早幼粒细胞白 血病 HL-60细胞及乳腺癌 MCF-7细胞均有强烈的抑制作用，抑制率分别达到 65.4土3.6%(HL-60,150}tg/mL,72h)和97.8+7.4%(MCF-7,4004g/mL,72h);而GLT 在相同浓度的抑制率仅为16.4+4.8%和33.3土10.10/x;GLX的体外抑瘤效果则强于 GLF，抑制率分别为82.5土8.9%和98.0夕.9%。形态观察和AnnexinV标记后流式细 胞仪分析显示GLF和GLX在IOO}ig/mL时都能诱导HL-60细胞发生凋亡，而GLT 则无此活性。据此，确定将乙醇提取的粗三菇，而非其精制品作为研究的样品。 运用上述总三菇香草醛定量方法和MTT体外抑瘤效果测定方法，我们对灵芝 属内5个不同种共26个菌株液体发酵菌丝体三砧提取物的总三菇含量和体外抑瘤 活性进行分析。结果发现总三菇含量从8.20士0.44%到15.85士。.07%不等，含量最 高的是T3(15.85士0.07%).26个菌株的三菇提取物对HL-60和MCF-7分别在 50t[g/mL到250pg/mL及400Fg/mL到600}Lg/mL范围内具有显著体外抑制作用。 其中效果最强的菌株是赤芝种(Glucidum)的L5菌株，125}Lg/mL时对HL-60细胞 的抑制率可高达91.410.9%(72h)。抑瘤率与菌株密切相关，但与其总三U含量并 不存在紧密的相关性。 AnnexinV标记实验及核DNA染色观察实验均显示赤芝G.lucidum菌株L2, L3,L5,L7,Goerstedii菌株02，无柄灵芝G.resinaceum菌株R2,Gsubamboinense 菌株S2，松杉灵芝Gtsugae菌株T3中的三菇提取物能诱导HL-60产生凋亡，而 非坏死。对HL-60的抑制作用还与阻滞细胞周期有关。赤芝菌株L5的三菇提取物 在125}tg/mL作用HL-60细胞48小时后，Go/Gi期细胞比例比对照组增加15.9%，而 S期细胞比例则下降了8.4%,G2/M期细胞数减少7.6%. 本研究为灵芝资源的开发及生产应用提供了依据和理论基础。 关键词:灵芝;菌丝体:总三菇含量:提取工艺;抗肿瘤 StudyofAnticancerousTriterpenesfromMyceliaof Twenty-sixGanodermaStrains Abstract Thisstudywasonthetriterpeneextractsfromliquidfermentationmyceliaof26strains fallinginto5differentspeciesofGanodermagenera(G.lucidum,Gtsugae,Goerstedii, Gsubamboinense,Gresinaceum). First,theoptimalconditionsofvanillin-perchloricacidcolorimetricreactionwere studiedforquantitativedetectionoftotaltriterpenoidderivedrfomGanoderma.They were:toevaporatesamplesolvent(methanol)at70`C,thenthesampleresiduewas reactedwith0.1ml5%(w/v)vanillininglacialaceticacidand1.0mlper