弓形虫GRA1和HBsAg二价核酸疫苗研究.pdfVIP

摘要 采用聚合酶链反应 方法：1．构建融合基因表达载体pcDNA3一HBsAg—GRAI (PCR)扩增出HBsAg前224个氨基酸的编码基因，用HclJr／屁棚，双酶切、纯 BamH，／肋o，位点；对重组子进行PCR扩增、双酶切初步鉴定后做序列测定；2． 用Hind Hind 定向克隆到pcDNA3III／FcoR，位点，对重组子进行PCR扩增、双酶切初步 blot检测表达蛋白的生化特性和免疫活性；4．大量提取重组质粒 DNA中HBsAg、GRAI编码基因，用弓形虫速殖子分别攻击感染免疫鼠及对照鼠， 观察比较其存活时间。 ／Xho 胞，且表达了具有免疫活性的融合蛋白，分别被HBsAb阳性血清及弓形虫免疫兔 各组。 一，．7 j^墨n 的免疫保护性，并优于混合免疫组，HBsAg可能作为蛋白载体起了佐剂样作用。 关键词融合基因，GRAI，HBsAg，核酸疫苗 ABSTRACT Aim：Forthe of the effectofDNA purposeimprovingprotective vaccineofGRAlof aneukaryotice Toxoplasmagondii,constructing vector GRAl andthe expressionexpressingprotein hi曲lyimmunogenic surface of B afusion and antigenhepatitisvirus(HBsAg)asprotein the inducedthechimericDNA investigatingprotectiveimmunity by vaccine． Methods：1．Constructionofchimeric vector geneexpressing was chain pcDNA3--HBsAg--GRAlHBsAgamplifiedbypolymerase 10 asa andaforward reaction(PCR)usingpCPplasmidtemplate primer andareverse theBclIandEcoRI restriction primerintroducing sites facilitate was enzymerespectively,tocloning；GRAlamplifiedby PCR asa andaforward anda usingpBluescript·GRAltemplate primer reverse Xho theEcoR／andIrestriction primer