三维肝癌类组织体模型建立及其肺侵袭关联蛋白筛查.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………-…-……………………I 英文摘要…………………-………………………………………………………·7 引言 ……………………………………………………-………………………12 参考文献…-………-·……………………………………………-………………．14 第一部分新的高转移潜能肝癌类组织体模型的建立 摘要…………………………………-………………” ··17 前言 …………………………………………………· 一17 材料和方法………………………………………· —18 结果……-……………………………………………·- ～30 讨论…………………………………………………… ～51 参考文献…………………………………………… ”56 第二部分肝癌肺侵袭模型建立及肺侵袭过程关联蛋白功能解析 摘要………-………·…-……………………………………………· “61 前占………………-…………………………………………--……” ～62 材料和方法…………………………………………………………“ ”62 结果………………………………………………………………” ”72 讨论………··…··……………-·………………………··……一 —90 参考文献…………………………………………………………… —92 文献综述…-………………………………………………………………………-94 附什……………………………………………………-………………………102 毁谢……………………………………………………………………………103 ，一f一 一一—上一一 譬r，1j一 中英文缩略词对照表 博十论女 =维肝懈类m纵挺型建立＆肺＆袭*H盈自筛矗 三维肝癌类组织体模型建立及肺侵袭关联蛋白筛查 中文摘要 平面培养模型是研究肝癌的发生发展和转移复发机制的较好模型．三维培养 模型在平面培养模型的基础上更接近在体状况。目前还缺乏在三维状态下研究肝 癌侵袭、转移等分子机制的实验模型。本研究应用了旋转壁式生物反应器和 PLGA支架材料．旋转壁式反应器具有微重力和低剪切力的特点，PLGA生物支 架能更好地支撑细胞形成的类组织结构。本文首先将人高转移性肝癌细胞 架粘附形成团块，随着培养时间的延长，细胞团聚集体更加紧密．且表面光滑， 行成高转移潜能肝癌类组织体；组化显示，细胞紧密排列．电镜超微结构显示类 组织体细胞具有了组织细胞特有的一些结构，例如桥粒和紧密连接。临床上葡萄 糖、LDH、ALB、7-GT和AFP常用来评价肝组织功能。与平面培养细胞相比， 类组织体形成过程中葡萄糖消耗下降，LDH分泌增加，显示在类组织体形成过 程中葡萄糖分解增强而葡萄糖氧化受到了抑制：类组织体形成过程中，7-GT和 AFP的分泌也明显高于平面培养细胞，这些结果显示类组织体获得了HCC特征 性酶(蛋白)产生和分泌的能力，并且结果同HCC病人血清病理特征一致。与 平面培养细胞相比。流式细胞技术显示类组织体中较低的S和G2．M期细胞，说 明其中的细胞生长和增殖不活跃。对类组织体HCC特征基因(AFP,ALB)、粘附