舒洛地特对肺上皮间充质转化的作用的研究.pdfVIP

目录 中文摘要……………………………………………………………．．3 Abstract……………………………………………………………．．3 缩略语………………………………………………………………．5 前言…………………………………………………………………7 实验材料……………………………………………………………．．10 一、主要试剂………………………………………………………．10 二、主要仪器………………………………………………………．11 实验试剂的配制………………………………………………………．．11 试验设计与方法………………………………………………………．．12 一、A549细胞的培养和传代……………………………………………．12 二、A549细胞毒性试验(MTT比色法)……………………………………．12 三、细胞形态学观察…………………………………………………．．13 四、RT—PCR检测相关基因表达……………………………………………13 五、间接免疫荧光检测相关蛋白表达………………………………………16 六、统计学处理………………………………………………………16 试验结果……………………………………………………………．．16 一、细胞毒性试验(MTT比色法)…………………………………………16 二、细胞形态学观察…………………………………………………．．20 三、RT—PCR检测相关基因表达……………………………………………22 四、间接免疫荧光检测相关蛋11表达………………………………………28 讨论…………………………………………………………………32 结论…………………………………………………………………35 参考文献……………………………………………………………．．35 文献综述……………………………………………………………．．39 致谢…………………………………………………………………51 2 中文摘要 特发性肺纤维化(IPF)是一种有着较高病死率的疾病，其特征为肺部成纤维细胞 的聚集、大量胶原沉积以及基质重塑。目前人们认为肺泡上皮细胞的上皮．间质转化 (epithelialto 发挥了重要作用，并且TGF．Dl可以促进这一过程的发生。糖胺聚糖类药物在临床 多用于抗凝，近来越来越多的证据证明以肝素为代表的糖胺聚糖类药物对于器官纤 维化有抑制作用。有研究表明其抗纤维化作用可能是通过其对凝血系统激活的抑制 产生的，但还有一些研究者发现糖胺聚糖类药物本身也有抗纤维化作用，它们可以 抑制1GF—p1在纤维化组织中的过度表达。舒洛地特是从猪小肠粘膜提取的天然物 质，由四种糖胺聚糖组成。它与低分予肝素相比有着更少的副作用和更方便的用药 方式。目前尚无其对于肺纤维化作用的报道。本研究以体外培养肺上皮A549细胞 为基础，通过细胞形态学观察、ImPCR法以及免疫荧光法检测舒洛地特对于TGF．pl 诱导的EMT过程相关标志物表达的影响，来验证舒洛地特在抗凝作用之外的抗纤 维化作用。结果显示，舒洛地特能够部分抑制TGF．p1诱导的肺泡上皮细胞形态的 变化和间质细胞标志物基因水平和蛋白水平的表达，说明它本身对EMT过程有抑 制作用，这也为IPF的治疗提供了一种新的研究方向。 关键词特发性肺纤维化上皮问质转化TGF．pl糖胺聚糖舒洛地特 ABSTRACT adiseasecharacterizednbroblast Idiopathicpulmona巧fibrosis(IPF)isby accumulation， tobeassociated excessive andmatrix whichcontinues collagendeposition remodeling withconsiderable and thinkthe temled morbiditym