所谓肺硬化性血管瘤中的两种主要细胞的基因表达差异及其意义.pdf

·中文论著摘要· 所谓肺硬化性血管瘤中的两种主要细胞的基因表达差 异及意义 刖 昌 肺硬化性血管瘤(pulmonarysclerosing 首先报道的肺部较为少见肿瘤，约占肺肿瘤的2-3％，最初认为是黄色瘤或错构瘤， 长期以来被归类于肺的炎性假瘤范畴。随着时间的推移，人们逐渐认识到：肺的硬 化性血管瘤并不是肺的炎性假瘤，而是一种实实在在的“良性”真性肿瘤，尽管其 发病率较低，但由于临床CT、磁共振等影像学检查极易与肺癌相混淆，更为严重 的是术中冰冻病理诊断又极易误诊为肺腺癌、细支气管肺泡癌以及类癌等，因而 手术切除常常过度，给患者造成损害，所以对该肿瘤的研究和诊断备受重视。在 我们的研究中，为了区分该肿瘤并不是炎性假瘤，也为了将来能够有一个更适合 该肿瘤的名字。我们将该肿瘤称之为“所谓的肺硬化性血管瘤”(So．called pulmonarysclerosing 其相平行的名称还有：良性乳头状神经内分泌肿瘤，良性肺泡细胞瘤，良性肺腺 瘤，错构瘤等。之所以出现这些名称，是因为到目前为止PSH的起源尚不清楚。 有人认为来源于内皮细胞、间皮细胞、肺泡上皮细胞、神经内分泌细胞等，最近 还有人提出是来源于多潜能的原始呼吸道上皮细胞的观点。在新版的WHO分类 当中，也只好将该肿瘤暂时放入“未定类肿瘤”当中。有人还对该肿瘤当中两种主 要形态不同的细胞是否为同一起源提出了质疑，并观察到部分肿瘤术后若干年出 现了复发和转移的现象。 针对PSH的分类困难、影像和病理诊断困难、起源不明、生物学特性不清 的特点，我们收集了40余例的PSH资料，利用免疫组化、激光捕获微切割(LCM)、 RT-PCR、单链构象多态性分析和DNA测序分析等方法，对该肿瘤进行系统深入 的研究，期望找到能正确诊断该肿瘤的方法，并对其起源及生物学行为方面作以 探讨。 材料与方法 1、材料 除病变旁正常肺组织蜡块标本40例。选其中17例女性，2例男性具有完整临床资料 的病例进行基因表达方面的研究。该19例当中，12例无自觉症状，为体检时发现； 7例有症状者分别表现为胸痛、咳嗽、痰中带血。胸部X线片或胸部CT显示均为 孤立性肿块，多位于肺的周边，呈圆形、卵圆形高密度影，边缘光滑，无毛刺及 分叶状改变。肿块位于右肺11例，左肺8例。未发现多发病灶及转移病例。发病 时间为15天至5年不等。 2、免疫组化 选用单克隆抗体细胞角蛋白(cytokeratin membrane endolase， 源细胞，CD68标记巨噬细胞，神经元特异性烯醇化酶(neuronspecific 抗体(00-7)。上述即用型抗体及S-P超敏试剂盒均购自福州迈新物技术公司。将 蜡块标本制成4pra连续切片，经脱蜡、脱苯、水化后进行HE和链菌素抗生物素 蛋白．过氧化物酶(S．P法)免疫组化染色。以已知阳性组织为阳性对照，PBS缓冲 液代替一抗为阴性对照。每张切片随机选取5个高倍视野，每高倍视野计数100个 瘤细胞，无着色及阳性细胞数5％为(．)，阳性细胞数5％为(+)。CK—L、SP—B、 的判断为膜／质表达；TTF-I、p53阳性表达的判断为单纯核表达或核、胞质同时 表达。 3、激光捕获目的细胞、提取总RNA 取病变组织蜡块，制成61am连续切片，Mayer’s苏木素一伊红染色，二甲苯透 明，切片晾干，放置在激光捕获显微切害1](1asercapmre (LM200型)的倒置显微镜的载物台上。将附有一层乙烯乙酸乙烯酯薄膜(ethylene 2 vinylacetatepolymer，EVA)的扁平塑料帽紧密覆盖在切片的表面。定位光束标定 被选细胞，发射激光束，分别捕获PSH组织中表面立方细胞和多角形细胞。每份 RNAIsolation 标本分别捕获5000-10000个目的细胞。按照PieoPureTMKit说明书 操作提取总PdqA(ArcturusBioscience，Mt。View，CA)。 4、RT-PCR RNA