携带缺氧诱导有丝分裂因子的骨髓间充质干细胞对急性肺损伤的作用的研究.pdfVIP

本课题受 国家自然科学基金 上海市科委学科带头人计划(07XDl4012) 资助 目 录 中文摘要(关键词)………………………………………………………I 英文摘要(关键词)………………………………………………………3 ……………………………………………………………………………………… 前言日U 舌 ………………………………………………………………………………………5 第一部分…………………………………………………………………．．10 第二部分 ………………………………………………………………。34 }‘ j 第三部分………………………………………………………………………53 崎 参考文献 ………………………………………………………………76 综述 ………………………………………………………………………………………80 英文缩写表 …………………………………………………………84 在读期间发表论文、奖励情况 ……………………………………．85 致谢 …………………………………………………………………………………………86 声明 ……………………………………………………………………………封三 L飞 中文摘要 实验目的 + 急性肺损伤(acutelunginjury,．L0存在发病率和病死率高的特点，目前临床 LPs)诱导炎症性肺损伤为研究对象，探讨炎症性肺损伤新的治疗措施及缺氧诱 factor，HIMF)这一肺损伤过 导有丝分裂因子(hypoxia—inducedmitogenic 程中新近发现的炎症因子的作用。由于HIMF旁分泌和自分泌作用于局部肺组织， stem cell，MSC)作为载体携带HIMF进 本课题以骨髓间充质干细胞(mesenchymal 入肺损伤局部，在除外HIMF旁分泌和自分泌作用的影响下观察单纯MSC和MSC 联合HIMF在炎症损伤的不同阶段对疾病发展的影响和可能的作用。 实验方法 ：▲■■y 采用经典的全骨髓分离法从Balb／c小鼠中分离MSC进行原代培养、传代及 性质鉴定。在确定分离的MSC为目的细胞后，与小鼠肺上皮细胞(MLEl2)在炎 症微环境中体外共培养，观察对MSC功能的影响；另一方面包装含目的基因HIMF 的慢病毒过表达载体，转导MSC确定转导效率、转导最佳MOI值、转导时间等。 在LPS诱导小鼠肺炎症性损伤的动物实验中，分为三组包括单纯生理盐水组、MSC 组、MSC—HI肝组进行研究。观察不同时间点不同干预组中反映炎症损伤各指标 ◆ 总蛋白水平)的变化和肺泡上皮细胞凋亡水平的变化，探讨MSC和HIMF在炎症 性肺损伤中的作用。 实验结果 1．全骨髓贴壁法可以成功获得高纯度的MSC，并经流式细胞仪检测、多胚层分 化实验得以验证和确认。 2．体外共培养炎症条件下MSC表达抗炎因子明显增加，具有免疫调节作用。 3．炎症条件下MSC细胞周期并没有发生显著变