构树遗传多样性的AFLP的分析.pdf

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西南各地,构树适应性广,萌芽力强,易繁殖,是路旁绿化与防堤护岸的重要树种。 其树皮、木材、枝桠、叶、花、果实、种子、根、乳汁等皆可综合利用,经济效益 潜力很大。构树属植物近20年来广受国内外学者的关注。 AFLP(扩增长度片段多态性)是一种新的DNA分子标记技术,以其稳定性好、 重复性高、覆盖面广、多态检出率高等优点被迅速且广泛地运用于生命科学的各领 域中。本研究首次采用AFLP分子标记技术研究构树种质资源遗传多样性、遗传结 构及群体间的相互关系,并结合分布区的生境状况,探讨其遗传多样性和遗传分化 的影响因素,为构树基因资源引进、评价、保存及遗传改良提供科学依据。主要结 论如下: (1)本研究采用云南省内的296个构树种质为材料。通过对常规SDS法、常 总DNA的提取效果进行比较研究,确定了改良SDS法较为适合构树基因组DNA的 切完全,并能获得清晰AFLP指纹图谱。此DNA提取方法快速、高效、经济,提取 的DNA质量好,特别对样品数量多、工作量大等情况下的研究尤为适用。 (2)通过对影响AFLP技术体系的各主要因素的研究,建立起适合构树的AFLP 分析的技术体系:酶切体系301aL,总体积中含纯化后的DNA4},tL;EcoRI和MseI 各5U,分步进行酶切;酶切完成后加入连接液,37。C连接过夜(10.12h);预扩增产 物稀释40倍用于选择性扩增;扩增产物加入4“L的双指示剂,95℃变性5min后, 在6%变性聚丙烯酰胺上恒功率(95W)进行电泳,然后进行银染显色。 个构树材料的遗传多样性进行了AFLP分析,都得到了清晰的指纹图谱,并且表现 出较好的多态性。利用7对引物对不同水系与不同家系的构树遗传多样性进行了研 究,7对引物共扩增出786条带,平均每对引物扩增112.3条带,多态性条带632条, 占总带数的80.4%。扩增片段大小在50.450bp之间。多态性最高的为引物组合 类型构树遗传多样性进行了研究,6对引物共扩增出831条带,平均每对引物扩增 I 揭示了构树种质具有丰富的遗传多样性。 version1.32 (4)对指纹图谱进行判读,构建O、1数学矩阵。利用POPGENE32 软件计算遗传多样性指数,采用NTSYS.pc2.11f计算软件,得到相似性系数矩阵, 并基于Nei’S遗传距离采用UPGMA法进行聚类分析。 (5)在构树不同层次遗传多样性比较中,不同类型的遗传多样性最高, 间的遗传变异,居群间分化程度低。并且不同层次的基因流值都大于2,说明基因交 流防止了由遗传漂变等引起的居群间的遗传分化。 (6)4个水系的遗传距离分析表明,以元江水系和金沙江水系之间的遗传距离 聚类图上可以看出,在遗传距离为0.003处取一结合线,可以将4个水系分为2大类, 第一类包括元江水系、怒江水系和红河水系;第二类为金沙江水系。 (7)10个家系的遗传距离分析表明,以石屏家系I和江川家系之间的遗传距 以看出,在遗传距离为0.008处取一结合线,可以将10个家系分为2大类,第一个 类包括怒江家系I,怒江家系II,怒江家系III,石屏家系I,石屏家系II,建水家系 I;第二个类包括建水家系II,四川家系I,四川家系II,江川家系。 (8)4个构树类型的遗传距离分析表明,以青构和白花构之间的遗传距离最大 离为0.006处取一结合线,可以将4个构树分为2大类,第一类包括红花构和青构; 第二类包括红构和白花构。 关键词:构树,遗传多样性,AFLP,聚类分析 inChinas is distributed mainly Abstract:肋淞so,zgf幻ppz!炒ifera is strongly, suitable,sprout widely

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