3、菌种选育手段.pptVIP

一、发酵菌株的分离和筛选 1、常用的发酵菌种 细菌 醋杆菌属的醋化醋杆菌、弱氧化醋杆菌 乳酸杆菌 枯草杆菌 丙酮丁醇梭菌 大肠杆菌 谷氨酸棒状杆菌 放线菌 链霉菌属 小单孢菌属 地中海诺卡氏菌 米苏里游动放线菌 酵母菌 酿酒酵母 假丝酵母属 产朊假丝酵母 解脂假丝酵母 热带假丝酵母 毕赤酵母属、汉逊酵母属 霉菌 曲霉属 米曲霉 黑曲霉 青霉属 青霉菌：点青霉、产黄青霉 桔青霉 根霉属 德氏根霉 米根霉、小麦曲根霉 红曲霉属 紫红曲霉 2、发酵菌种获得的一般途径 (1）微生物保藏单位获取 (2）自然界分离 (3）野生菌株诱变 (4）基因重组 (5）动植物细胞 3、 发酵菌种的基本要求 ①能在廉价原料上快速生长； ②生长条件易于掌控； ③对设备和操作方式适应性强； ④菌株生产性能稳定性强； ⑤产物产量高，积累浓度高； ⑥产物的回收容易； ⑦抗杂菌、抗噬菌体能力强； ⑧菌体不是病原菌。 4、菌株的分离和筛选 （1）菌株分离（separation）：将样品中混杂的各种微生物通过分离技术区分开的过程； （2）筛选（screening）：从多株具备一定特征菌群中选择出符合标准的菌株的过程。 通常，分离中的一些措施本身就具有筛选作用。筛选又是通过分离而实现的。 （3）菌种分离的一般过程 调查研究（包括资料查阅） 试验方案设计 ? ? 含微生物样品的采集 （如何使样品中含所需微 生物的可能性大） ? ? 样品预处理 （如何在后续的操作中使这种可 能性实现） ? ? 菌种分离 采样时应注意的问题: 土壤微生物的分布 采土深度 土壤植被情况 采样季节 土壤的酸碱度 样品的预处理 物理方法：热处理；膜过滤法；离心法 化学方法 诱饵法 生长条件的选择与控制原理 控制营养成分 控制培养基酸碱度 添加抑制剂 控制培养温度 控制通气条件 选择性分离技术 富集液体培养技术 固体培养技术 增加混合菌群中所需菌株数量的一种技术 技术特点：给混合菌群提供一些有利于目的菌株生长或不利于目的菌以外的其他菌型生长的条件 培养方式 分批培养方式：以最大比生长速率 （μmax）筛选，存在选择压力的控制、移种时间和次数等问题 连续培养方式：以比生长速率（ μ）筛选 B. 固体培养技术 常用于分离某些酶产生菌 选择压力：在选择培养基中加入所需酶的基质 纯种分离 快速筛选方法简介 摇瓶培养筛选法 菌株性能鉴定 1）微生物生物学特征的初步鉴定； 2）产物的定性或定量分析 ； 3）前期评价（生长特性、毒性、效价、稳定性等）； 4）工艺指标试验（培养液粘度、菌体聚集度等）。 举例：氨基酸产生菌的筛选 样品 ? ? 预处理 ? ? 初筛（除真菌） ? ? 在分离平板上生长获得多个单菌落 复印平板（copy 法，对应到copy前相应位置，找到目的菌落） 平板培养，其中有产生氨基酸的菌落分泌氨基酸 u.v线杀死长好的菌落 再铺上一层含营养缺陷型试验菌的琼脂 培养后 产氨基酸菌落周围有生长圈 ? ? 乳酸菌分离 取未成熟的酱醪样品1g至无菌磨口瓶中 ? ? 加麦芽汁至瓶口处，封塞，25℃培养24-48h 培养基中长出绢丝状波动物，镜检 杆状，阳性染色 初步断定乳酸菌 ? ? 用选择性培养基分批富集培养2-3代 稀释分离法分离单菌落，培养基为含麦芽汁、CaCO3的琼脂培养基? ? 根据透明圈挑选菌落 ? ? 性能测定（镜检杆状，染色阳性；乳酸纸层析鉴定） ? ? Rf值定性 （有机酸呈黄斑点） ?? 乳酸生成量测定（滴定法） 产链霉素放线菌菌种分离（从退化菌种中筛选） 取工业发酵液（含孢子）样品1环 放入带玻璃珠的装有1