免疫组化技术在病理诊断和的研究中的应用.ppt

免疫组化技术在病理诊断和研究中的应用 南通医学院 陈莉 “备”则“倍” 有准备、有规划的人生更精彩！ （二）、决定转移瘤的原发部位 到目前为止只有很少的器官或组织特异性抗原可以被识别，这就限制了免疫组化在解决这类问题的能力，一些高度限制性、特异性的抗原如针对血管肿瘤的Ⅷ因子相关抗原，针对乳腺癌或真皮肿瘤伴大汗腺分化的大囊病液体蛋白（Gross cystic disease fluid protein），针对黑色素瘤、肾血管平滑肌脂肪瘤的HMB-45，针对平滑肌、骨骼肌肿瘤的肌肉特异性肌动蛋白和肌球蛋白（Actin/Myosin），横纹肌肉瘤中除了Actin/Myosin阳性外，还有Desmin、Myoglobin阳性，针对前列腺癌的前列腺特异性抗原（PSA），针对甲状腺滤泡细胞癌的甲状腺球蛋白等，有趣的是这些抗原开始并不是从这些特异性肿瘤中发现的。 最近对于转移癌的进一步研究中发现来源于不同部位的肿瘤在细胞角蛋白上有区别，如CK20在胃肠道癌、胆管癌、胰腺癌中阳性，而在肺癌、乳腺癌、肾癌中阴性。Merkel细胞阳性，而其他神经内分泌肿瘤阴性。对淋巴结来源不明的转移性肿瘤，用角蛋白抗体获得阳性支持癌的诊断，用Vimentin抗体获得阳性支持肉瘤的诊断，用甲状腺球蛋白抗体获得阳性支持甲状腺癌的诊断，用S-100蛋白抗体获得阳性支持黑色素瘤的诊断，这就为临床处理提供了依据。 不同克隆所要检测的是相似抗原，相同抗原可作为浓缩形式或未稀释形式，还可作为培养基上清液，或即用型液体出售，同一商品可在不同分销商名下作为不同名称的商品出售，购买者所购买的试剂不必去证实制造商及分销商所声称的灵敏度和特异性，而且有趣的是所有商业抗体都标明“非诊断用”，但事实上这些抗体正是用于诊断这一目的。 关于免疫组化染色的标准问题最初是由美国生物染色委员会(Biological staiN commissioN USA)的一项小研究而引发的，该组织评估了5家独立实验室针对3种多发性肿瘤块进行的单纯抗-角蛋白抗体染色，所报道的染色形式在所参加的5家实验室中有显著差别[34]，另一项关于乳腺癌中激素受体免疫染色在多家实验室的研究中也得到了不尽相同的结果。 毫无疑问，免疫组化如能正确应用，确实是一种有力而又有用的诊断工具，它为外科病理学家提供了高水准的专业服务，补充了他们的观察技巧，拓宽了形态学诊断的潜能。为了保证免疫染色的高质量， 我们对切片处理方面的所有问题都应认真考虑与检查，以确保组织抗原的最佳保存。免疫组化在未完成之前无可靠的检测手段，染色结果常反复无常，这与许多因素有关，如抗原保存，蛋白酶消化，增强技术及对抗体的管理、使用和试剂的浓度，因此稳定质量的保持比其它的实验室技术更困难，除非进行大量的免疫组化操作，否则保持好的质量与取得合理的经验是很难的。 每次使用新抗体时都必须检测其最佳稀释度、使用免疫组化方法与组织固定等。但使用一些试剂盒或即用型试剂，可以减少上述麻烦，使用方便。但试剂盒也有其自身的缺陷，这些即用型已稀释过的抗体给人有一种方便与稳定的假象，某些试剂盒无法达到期望效果，但又难以将这些试剂定为假货。药盒即用型试剂由制造商设计成适合所有使用者，其试剂浓度并不是最佳浓度，因为各个实验室有不同的固定与组织处理方法，所以使用即用型试剂的结果常并不是最佳结果。 免疫染色质量控制需要设置对照组，包括已知存在抗原的阳性对照组，如含抗原的正常组织，最好是使用含少量抗原的瘤组织作为对照，使与所检测切片中的抗原水平趋于一致，而且后者可能含有表达抗原的非瘤组织，可以作为内部对照。阴性对照，应用缺乏抗原的组织切片。空白对照，即采用非免疫血清，缓冲液，或其它无特异性的抗体（最好是同一免疫球蛋白的类型）以取代初级抗原的位置或用抗原预先吸附抗体而除去阳性染色，这常是可靠的对照，但由于该法不实用而未被常规使用。 实验室在确定使用新抗体之前，使用者应该了解下列情况： １、确定对于所要研究抗原的最敏感抗体； ２、检测抗体的最佳工作浓度； ３、熟悉相关试剂的灵敏度、特异性、特别应了解哪些组织表达这些抗原，确定免疫染色的方法及细胞中的抗原分布，这将有助于确定阳性染色，特别是当细胞表达水平低时尤为重要 。 ４、使用于诊断样品之前，应用阳性切片进行预试验以获得使用抗体的经验； ５、在实验室中应有一份该试剂已出版的文献作为参考资料，对于非特异性染色的假阳性等情况，要心中有数，以避免不确切的解释、推论等。 优秀免疫组化切片的观察 十二、免疫组化染色的说明与缺陷 １、免疫组化染色的形式，病理