表面等离子共振传感器（spr）的应用-仪器信息网.docVIP

表面等离子共振传感器在生物检测中的应用 浙江大学 省基金项目编号：Z504009 项目名称：基于表面等离子共振原理的双光束检测技术与实验研究 前言 表面等离子体子共振(surface plasmon resonance,SPR)是一种物理光学现象[1]。光在玻璃界面处发生全内反射时的倏逝波，可以引发金属表面的自由电子产生表面等离子波。在入射角或波长为某一适当值的条件下，表面等离子波与倏逝波的频率和波数相等，二者将发生共振，入射光被吸收，使反射光能量急剧下降，在反射光谱上出现共振峰(即反射强度最低值)。当紧靠在金属薄膜表面的介质折射率不同时，共振峰位置将不同。 表面等离子激元共振(SPR)的现象最早于五十年代被预言。60年代Otto以及1971年Kretschmann分别发表了里程碑性质的文章，激发了人们应用SPR于传感机制的热情，而Kretschmann结构也为SPR型传感器奠定了基础。自1983年Liedberg[2]将其用于检测抗原体反应后，SPR以其具有的实时，原位及无损检测等优于其他生物检测技术的优势，引起了人们越来越浓的兴趣。 科学仪器是从事科学研究的物质手段。“工欲善其事，必先利其器”，以至科学研究之成败决定于探测实验方法和仪器。SPR技术自80年代初期引入到传感器界，发展十分迅猛。曾有人预测，基于SPR的免疫生物传感器是最具有商品化潜力的一类传感器。这样的评价，一方面来源于对FET等传感器的技术困难的失望和畏惧，另一方面，是受到现代微电子工艺的支持以及廉价仪器就可以实现SPR检测的鼓舞。 如今，SPR传感器的理论分析、器件研制和实用系统开发日趋完善。由于SPR技术具有能实时监测反应动态过程、分析样品不需要纯化、生物样品无需标记、灵敏度较高、无背景干扰等特点，在生物科学领域应用中取得了长足进展。它以其优异的灵敏度、实时响应特性引起了科研人员和商业机构的广泛重视，被广泛用于环境监测、医疗、食品分析等[3]，对于生物大分子相互作用机制分析，效果尤其显著，目前已成功地研制出各种类型的SPR免疫传感器。 生物分子学的发展，既为SPR型生物传感器提供了分子识别机制的基础，又提供了其应用的场所。与FET、热生物传感器、与SAW和酶电极技术相比，SPR以其高灵敏度、快速响应、试剂准备简单和操作简易而独树一帜。目前，基于SPR的生物传感器及系统已逐渐成熟，对其研究步入高峰期，在具有多样性和高灵敏度生物传感器的迫切需求下，开始全面从实验室走向市场，现在已经有一些商用仪器投入科研与医药事业中。其中最为著名的是BIACORE系列产品。这些系统是在瑞典林平彻大学Liedberg等人的研究基础上，研制出可以用于基因序列分析、食品检测抗原抗体分析等方面的生化仪器，都是基于Kretschmann结构，采用专门的SPR系统和独立的微机相配合，软件控制液体流量、数据记录及SPR谱的分析，系统实时监测，可以连续数日工作，自动完成分析过程。但是价格高达几十万美元，不适合普遍使用。另外，Quantech、Texas Instruments和EBI等公司也都研制出了自己的SPR仪器系统。 折射率测量 SPR传感器有四种主要的检测方法：角度调制[4]，波长调制[5]，相位调制[6]，强度调制[7]。其中，角度调制应用最普遍，如今市场上的商用仪器多数采用角度调制的方法。 采用角度调制测量时，入射光波长固定，反射光强度是入射角的函数，其中反射光强度最低时所对应的入射角称为共振角。 SPR对附着在金属薄膜表面的介质折射率非常敏感,当表面介质的属性改变或者附着量改变时，共振角将发生变化。因此，SPR谱（共振角的变化vs时间）能够反映与金属膜表面接触的体系的变化。 如果在金属薄膜外侧加上一层待测物质，试样与金属薄膜的耦联影响了结构的折射率，从而影响了反射光、衰减波以及等离子体共振。所以，只要测得SPR谱，就可以得到样品折射率。若采用监控的方式，还可以实时反映样品溶液折射率的动态变化。 生物传感器 用SPR技术虽然可测得紧靠在金属薄膜表面介质层的光学常数。但是，进一步获得该介质的其他信息才是SPR研究的主要目的。例如通过膜厚估计成膜物质的结构排列，通过介质的折射率（n），膜厚度(d)和吸收系数（k）计算吸附物质的质量，进而求得相互作用生物大分子之间的键参数。 将普通的SPR传感器与生物分子互作技术(biomolecular interaction analysis，BIA)[8]相结合，就可以制作全新的SPR生物传感器件。因为SPR光谱随金属表面的折射率变化而变化，而折射率的变化又和结合在金属表面的生物分子质量成正比，因而可通过对生物反应过程中SPR光谱的动态变化获取生物分子相互作用的特异信号。这样，它就能在不需使用荧光或同位素标记甚至无须纯化各种生物组分