灵芝虫草发酵水稻秸秆过程的研究.pptVIP

做什么？ 研究目标是： （1）建立较好的秸秆降解条件 （2 ）获得降解特性和机理 二 固体发酵 固体发酵技术发展已久，应用广泛。在古代中国就已经被应用在制曲酿酒、腌制食品、肥料堆积等方面。受科技发展的限制，在过去的很长一段时间内固体发酵技术都停留在一个比较原始落后的状态，甚至在现代的工业生产上仍然在沿用这样的发酵技术，不过在最近十年间，关于固体发酵技术的研究和应用得到了迅速发展。 固体发酵技术分为两种：固体发酵（Solid State Fermentation)和固体基质发酵（Solid Substrate Fermentation）。其优势有以下几点：首先，固体发酵使用的培养条件相对粗放而且培养基只需要比较简单的前期处理；其次，工业生产的资金投入比较小，尤其在工业生产前期投入少，利于规模化身缠；另外，固体发酵的产品性能较好、而且工业生产时环境污染比较小，更有利于生物循环。 怎么做？ 研究内容： 1、灵芝培养基的优化 □初步考察氮源、pH、不同无机盐等对菌生长的影响（比较生长速度，并测定纤维素酶、木质素酶活力）； 2、在优化培养基的基础上，考察降解机理，即利用红外检测不同发酵阶段水稻秸秆组分的变化，利用电镜观察不同阶段菌丝的侵入情况，利用XRD考察不同阶段水稻秸秆中结晶纤维素的含量情况 灵芝培养基的优化 1、材料与方法 1.1菌种：赤芝和北虫草，均为本实验室保藏 菌株。 1.2 培养基：斜面培养基 1.3 营养：碳素、氮素、无机盐，适量的生长素以及微量元素。在含有纤维素、半纤维素、木质素的基质上灵芝均可生长。 1.4确定因素： 碳源：水稻秸秆 培养温度：28℃ 适量的生长素：vit B1 1.5各种因素变化对产酶活性的影响 改变一下个单因素条件对产酶活性进行单 因素分析： ①氮源种类：（NH4）2SO4、尿素、胰蛋白胨、牛肉膏、 ②发酵液初始PH：6.5,6.0,5.0 ③无机盐：MgSO4、KH2PO4 ④含水量：60-65%,即干料：水=1：1.4-1.5 ⑤最后，合理的基质碳氮比（C/N）是人工栽培虫草的必需条件，否则，将导致或者菌丝生长缓慢、或者污染严重、或者气生菌丝过旺，难以发生子座，即便有子座分化，其产品数量和质量均有不同程度的下降。生产中一般以调C/N在3-4：1之间为宜。 1.6 改变单因素分别进行培养，比较菌质的生长状况和纤维素酶活力。 1.7测定纤维素酶活力：去培养得到的菌质接种于选择培养基上培养，获得菌落后用刚果红染色，并用蒸馏水洗去，再用1mol/L盐水清洗，测量透明圈大小，并计算酶的相对比活力:A=水解圈直径/天数，A大致反映酶活力高低。 1.8选择一组菌质生长状况最好及产纤维素酶活力最好的一组因素。 1.9在经优化的培养基上培育赤芝虫草得到灵芝虫草 菌质。 纤维素酶的降解机理 2.1在优化后的培养基上利用赤芝和虫草降解水稻秸秆。 2.2利用红外检测不同发酵阶段水稻秸秆组分的变化：取适量于不同发酵阶段的水稻秸秆用压片法或者是粉末法于红外光谱仪中检测并分析各组分在不同阶段的变化。 2.3同时，取不同阶段的水稻秸秆在显微镜下观察并记录不同阶段菌丝侵入秸秆的情况 2.4并利用X射线衍射（XRD）方法考察不同阶段水稻秸秆中结晶纤维素的含量情况 。由于 结晶的纤维素所有的羟基都形成分子内或分子间的氢键，没有游离羟基 ，故利用XRD检测方法可测得结晶纤维素含量 2.5根据通过①显微镜观察所得的不同发酵阶段菌丝入侵秸秆的情况②利用红外光谱检测技术得到的不同发酵阶段水稻秸秆各组分的变化情况结果③利用XRD检测方法测得的结晶纤维素含量。综合三种结果可分析得到纤维素酶降解水稻秸秆的机理。 研究进度 参考文献 1、《发酵工艺学》，何建勇主编，中国医药科技出版社，2009年。 2、《纤维素生物技术》，陈洪章主编，化学工业出版社，2011年第二版。 3、孙东平，潘锋，史小丽，杨树林.南京理工大学化工学院.中草药2000年第12期第31卷药材 4、孙军德，陈南，秸秆纤维素降解细菌的筛选及其产酶条件的研究，沈阳农业大学，土地与环境学院，2010年。 5、李江颂，李日强，王爱英，冀伟江，固态发酵玉米秸秆的菌株组合和发酵条件研究，山西大学环境与资源学院，太原，2010年。 6、王禄山，微生物对天然结晶纤维素降解机理的研究，山东大学，2004。 宝山壁画 宝山壁画是引人注目的昂贵文物。此壁画发现于阿鲁科尔沁旗东沙布乡境内。1994年列为“全国十大考古新发现”之一。宝山壁画中最引人注目的是《杨贵妃教鹦鹉图》。该画高0.7米、宽2.3米，用于笔重彩绘制，最突出的