极性脂质的质谱分析方法地研究及其应用.pdf

验证，该方法的提取回收率(82．6％．104．2％)、日间精密度 (1．44．3．87)、日内精密度(2．74．5．87)、最低检出限(O．50．0．87 ng／m1) 和最低定量限(1．5—2．6 ng／m1)能够满足复杂生物样本中磷脂和硫苷 脂的分析要求。 其次，本文建立了高效液相色谱和电喷雾串联三重四级杆质谱联 用的方法，对神经酰胺、鞘磷脂、葡萄糖神经酰胺和乳糖神经酰胺的 分子种亚类组成进行测定。分析标准品在碰撞诱导活化解离过程中的 特征性碎片离子，建立相应的母离子／子离子对数据库。以鼠脑为样 本，先利用氯仿／甲醇法提取样品中的脂质，后利用固相萃取小柱富 集、纯化极性脂质，将样品注入高效液相色谱系统，对神经酰胺、鞘 磷脂、葡萄糖神经酰胺和乳糖神经酰胺进行分离，洗脱物进入质谱， 在多反应监测模式的多个时间窗口下，利用已建立的母离子／子离子 对实现四种鞘脂分子种的快速实时监测。经验证，该方法的提取回收 (2．42．3．81)、最低检出限(O．03-0．08 ng／m1)和最低定量限(O．10-0．25 ng／m1)能够满足复杂生物样本中鞘脂的分析要求。 其后，本文将直接进样分析方法和液质联用分析方法结合在一 起，建立了一种极性脂质的在线同时分析方法。设计以针泵注射器、 六通阀和三通阀为主体的自动进样装置，先利用针泵注射器将样品直 接导入离子源中，在特异性的母离子和中性丢失模式下，完成对六类 磷脂和硫苷脂的扫描分析，再将样品导入六通阀的定量环中，最后将 一定体积的样品注入液质联用系统，经液相分离后，在多反应监测模 II 万方数据 式下完成对神经酰胺、鞘磷脂、葡萄糖神经酰胺和乳糖神经酰胺的检 测分析。该方法能在40分钟内完成11种极性脂质(300种以上分子 种)快速、准确的同时在线分析。本文应用该方法分析了三种不同动 物来源(鼠、鸭、三文鱼)脑组织中的极性脂质，得到鼠脑中307种， 鸭脑中308种和三文鱼脑中324种极性脂质分子种信息。比较可得， 不同动物来源的磷脂差异显著，特别是三文鱼脑中富含鼠脑和鸭脑所 不含的多烯磷脂；不同动物来源的鞘脂差异主要表现在含量上，基本 的分子种总类相似。 最后，本文从三文鱼加工副产品中提取鱼油，利用尿素包合法富 集多不饱和脂肪酸，以生物酶法转酯化将其结合到大豆卵磷脂上，形 成富含多烯磷脂的新型大豆卵磷脂。设计正交实验，以改性后大豆磷 脂中的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)的得率为指 标，得到最佳合成条件：大豆卵磷脂和鱼油的比例为1：8，磷脂酶的 8 添加量为18％，反应温度为50℃，反应时间为1h，体系中的水分 含量为4％。在最佳条件下，大豆卵磷脂的EPA和DHA得率为 24．13％。利用己建立的极性脂质在线分析方法，分析改性前后大豆 卵磷脂的分子种组成差异，得出大豆卵磷脂中主要成分为磷脂酰胆 碱，磷脂酰乙醇胺，磷脂酰肌醇和磷脂酰丝氨酸。改性后大豆卵磷脂 与前者最大的区别为多烯磷脂分子种的增加和溶血性磷脂含量的上 升。改性前大豆卵磷脂的不饱和度较低，最主要的磷脂分子种为PL 34：2，PL36：4和PL 36：3。经过磷脂酶改性后，大豆卵磷脂新增了许 多多烯磷脂分子种，占到总量的27．41．37．01％。改性前大豆卵磷脂中 m 万方数据 溶血性磷脂含量较低(3．52．4．57％)，改性后大豆卵磷脂的溶血性磷 脂含量增加(26．85．36．01％)。为了延长改性大豆卵磷脂的货架期， 本研