干细胞分化为胰岛样细胞研究近况.docVIP

干细胞分化为胰岛样细胞的研究近况 作者：胡彦华 作者单位：哈尔滨医科大学附属第二医院 肝胆胰及腹腔镜外科，黑龙江 哈尔滨 150086 【摘要】 糖尿病是严重危害人类健康的疾病之一。胰岛移植是治疗糖尿病有效的方法，但供体来源问题限制了它的广泛应用。寻找新的细胞来源成为当务之急。干细胞研究为此开辟了一条新的途径。本文综述了近年来干细胞诱导分化为胰岛样细胞的研究进展，并对存在问题作了分析。 【关键词】 干细胞 胰岛样细胞 糖尿病 糖尿病(diabetes mellitus，DM)是严重威胁人类健康的疾病之一。患者出现胰岛素抵抗或分泌减少造成糖代谢紊乱，并继发眼、肾、神经及心血管等脏器的损害。尽管由于胰岛素的应用，尤其是近年来在胰岛素剂型以及给药途径等方面均取得了巨大进展，但实践证明外源性胰岛素并不能像人体自身分泌胰岛素那样完美地控制血糖并恒定维持血糖正常。胰岛移植，替代功能丧失的胰岛mdash;mdash;细胞替代疗法(即补充Β细胞的功能)是治疗糖尿病的重要方法，是一种更接近生理方式的有效方法，可实现对血糖进行持续监测和精细调节。它较目前临床常用的胰岛素治疗具有一定的优势。2000 年加拿大的Edmonton研究组在同种胰岛移植中取得了可喜的成绩，他们应用移植更多的胰岛细胞和不含糖皮质激素的新型免疫抑制剂的方法,使连续7例患者获得了停用胰岛素并维持良好血糖超过1年的效果［1］，但供体来源严重不足，免疫排斥问题限制着这种疗法的应用。应用干细胞(包括胚胎干细胞和成体干细胞)诱导分化为胰岛样细胞可能是解决这些难题最有前途的一种方法：①一旦建立了可大量诱导分化得到胰岛细胞的细胞系,就可大规模生产可供移植的胰岛细胞，不仅1 型糖尿病患者有了有效的治疗方法,部分2 型糖尿病患者也可从中受益。②通过自体干细胞诱导分化得到的胰岛细胞，可避免同种异体移植带来的免疫排斥问题。因此，干细胞分化来的胰岛样细胞将是糖尿病细胞替代疗法的最佳种子 细胞。 1　干细胞分化为胰岛样细胞 干细胞(stem cell)是来自于胚胎或成体，具有在一定条件下无限制自我更新和增殖分化的能力，能够产生表现型与基因型和自己完全相同的子细胞，具有于合适的微环境里向多系分化的潜能，产生组成机体组织﹑器官已特化细胞的一类细胞［2］。按发生学来源分为胚胎干细胞(embryonic stem cell，ESC)和成体干细胞(adult stem cell，ASC)。 1.1　胚胎干细胞　目前认为，ESC存在于胚胎发育早期阶段，主要来源于囊胚的内细胞团和受精卵发育至桑椹胚之前的早期胚胎细胞，最显著的特点是具有自我更新、分化为各种类型细胞的能力［3］。1981年、1998年英、美科学家先后建立鼠和人的ESC系［4－5］，为研究ESC奠定了基础。研究人员已经由ESC诱导分化出血液细胞、心肌细胞和神经细胞等［6］。鼠［8－10］和人［13－14］ESC向胰岛样细胞分化均已有成功的实验报道，现论述如下： 1.1.1　鼠胚胎干细胞　在鼠ESC向胰岛样细胞分化的研究中，主要应用两种策略进行分化：第一种应用基因表达捕获的方法。这种方法，以前应用于心肌细胞的选择［7］。Soria等［8］构建含有人Insulin/Βgeo基因和Pgk-Hygro（phosphoglycerate kinase-hygromycin resistant gene,磷酸甘油酸激酶-潮霉素抗性基因，用于分选转染细胞）基因的质粒，转染鼠ESC-R1，在含潮霉素的培养基上选出转染克隆，再使其形成拟胚体（embryoid bodies，EBs），逐步培养，获得细胞克隆IB/3x-99，在体外IB/3x-99表现其胰岛素分泌量随葡萄糖浓度的增高而增高，该细胞团簇移植于糖尿病鼠后，可纠正糖尿病鼠的高血糖；第二种应用复杂的多步分化法。Lumelsky等［9］以ESC向神经细胞分化的途径为基础，经过实验创立了五步序贯培养策略。研究中，待小鼠ESC诱导形成EBs，将其诱导分化为能表达巢蛋白(Nestin)的细胞，然后进一步扩增Nestin阳性细胞，最后诱导分化Nestin阳性细胞为胰岛样细胞团。葡萄糖刺激时胰岛样细胞团的胰岛素含量可增加40倍，但胰岛样细胞团的胰岛素分泌量仅为正常Β细胞的1/50，而将此细胞团植入已制备好的鼠糖尿病模型的皮下，实验组(移植组)比对照组(未移植组)的鼠存活期明显延长。但是，移植后不能纠正糖尿病小鼠的高血糖，原因可能是由于胰岛样细胞团的胰岛素分泌量较低和移植的细胞数量不够。为了提高胰岛样细胞的含量及胰岛素的分泌量，Hori等［10］改进了多步分化法，在培养液中以磷酸肌醇激酶抑制剂