水稻抗坏血酸过氧化物酶基因OsAPX1表达载体构建及其功能研究.pdfVIP

Construction Overexpression Vector of Rice Ascorbate Peroxidase Gene OsAPX1and Function Analysis A Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for the Master’s Degree of Science By An Liaoyuan Supervised by Prof. Liu Yongsheng Specialty: Biology College of Bioengineering of Chongqing University, Chongqing, China April 2012 摘 要 水稻是世界上人类赖以生存的主要粮食作物，随着环境条件的的日益恶 化，严重影响到水稻品质和产量。在环境胁迫下植物体内容易产生大量的活性 氧，造成活性氧在植物体内大量积累，如果不能及时清除体内积累的活性氧， 就会破坏活性氧代谢平衡，引起植物氧化损伤，对植物造成损害。因此，清除 植物体内积累的活性氧提高植物的抗氧化能力是目前抗氧化相关研究的主要 领域。 抗坏血酸过氧化物酶（ascorbate peroxidase, APX ）是植物体内清除活性氧 的一种关键酶，广泛存在于植物和一些藻类中。APX 能清除植物体内过量积 累的活性氧，有效的保护植物免受氧化作用造成的损伤。APX 催化过氧化氢 分解产生水，消除过氧化氢的强氧化作用。故 APX 能增强植物的抗氧化性， 在氧化胁迫应答过程中发挥着重要的作用。在植物中，APX 是一个多基因的 家族，根据其在细胞中的位置不同可分为：叶绿体基质 APX(sAPX) 、线粒体 APX 、叶绿体类囊体APX （tAPX ）、微体APX(mbAPX)和胞质 APX(cAPX) 。 由于水稻基因组序列测序成功，根据水稻基因组序列知水稻含有 8 个 APX 家 族成员。水稻中 APX 家族基因又可分成 3 种：APX1 和APX2 属于细胞质型； APX3 和APX4 属于过氧化体型；APX5 、APX6 、APX7 和APX8 属于叶绿体型。 本研究选择水稻APX1 基因为研究对象，克隆得到水稻 OsAPX1 基因，连 接到植物表达载体 pHB 载体上，构建成过量表达 pHB-OsAPX1 载体，通过农 杆菌介导的遗传转化法导入水稻基因组中，通过组织工程技术获得阳性转基因 植株，然后分析转基因植株的表型，研究该基因的生物学功能。通过载体 pHB 携带的抗性标记基因鉴定APX1 基因是否整合到水稻基因组中，鉴定结果表明 APX1 基因已经整合到水稻基因组中。对转基因植株进行半定量 RT-PCR 实验， 结果表明在转基因植株中APX1 的表达量明显增加。田间水稻抽穗灌浆期期处 于高温期，分析其表型。转基因植株的田间表型分析表明高温条件下转基因植 株相比野生型秕谷率明显降低，实验结果得出 OsAPX1 基因可能与水稻抗热有 关。在高温热击和过氧化氢胁迫下，转基因植株相比野生型要长的好。高温热 击胁迫下，转基因植株比野生型的耐热性强，表现为更高的苗长和更多的绿色 鲜活部分。过氧化氢胁迫实验结果表明，与野生型植株相比转基因植有强的抗 氧化性。