猪α干扰素基因在毕赤酵母中的表达和活性检测.pdf

独创性声明 本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独 立完成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致 谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。 与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢 意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位(毕业)论文作者亲笔签名：雇锈久 日期：矽D富．z’ l箩 ，…r’ 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定，即学 校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或 部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。 口 不保密，本论文属于不保密。 学位(毕业)论文作者亲笔签名：雇囱欠 日期：例子．厶f? 指导教师亲笔签名： 景 日期玖死p，(，／ 摘要 猪的病毒性疾病种类多、危害大，因此研发具有广谱抗病毒作用的猪干扰素制剂具有重 大意义。为了更好地利用基因工程技术来开发重组猪干扰素制剂，防治猪病毒性传染病和进 一步开展猪干扰素分子生物学研究，本文进行了猪a干扰素基因的克隆、表达及其重组蛋白 抗伪狂犬病毒的研究。 T载体上，经序列测定证实克隆到猪a干扰素。 产物经纯化回收后，克隆到pMDl8-Simple I单酶切 插入到表达载体pPiCZaC启动子下，并形成正确的开放阅读框(oRF)。用Pine 培养基，置30℃温箱培养3~5天，结果获得多个单菌落。通过提高抗生素浓度，筛选出高 抗性的转化子。先用BMGY培养基激活培养，离心后用BMMY培养基重悬菌体。每24小 时添加一次甲醇，保持其终浓度为1．O％，诱导表达96小时后，收集菌液。取少量上清液进 BHK-21细胞上抗伪狂犬病毒粤A强毒株的实验。 实验结果表明，本研究克隆了猪a干扰素的成熟肽基因序列，全长约50lbp核苷酸，编 分析，可见一条分子量约19．4KDa清晰蛋白条带，与理论值相符。抗病毒实验结果显示， lo慨． 结果表明，本实验成功地在毕赤酵母表达系统中分泌表达猪Ct干扰素并进行了rPoIFN-a 抗伪狂犬病毒的研究。为基因工程生产rPolTN-a奠定了基础。 关键词： 猪a干扰素毕赤酵母分泌表达伪狂犬病毒 ofPorcine Expression Interferon一伐GeneinPichia pastoris and ofAnti·-PRV Determining Activity Abstract Chmas virus porcinediseasesbcx30memoleandmore interferon-a complex．Porcine abroad of that (PolFN-a)isspeetnma roleson and cytokineplays